宏全基因組高通量測(cè)序測(cè)序

來源: 發(fā)布時(shí)間:2022-10-14

生工高通量測(cè)序樣品要求,RNA樣品:請(qǐng)?zhí)峁舛取?50 ng/μl、總量≥2μg的總RNA樣品,樣品請(qǐng)去蛋白并進(jìn)行DNase處理;請(qǐng)務(wù)必提供每個(gè)樣品具體的濃度、體積、制備時(shí)間以及物種來源。比較好附上QC數(shù)據(jù),可以是電泳膠圖、分光光度值、Nanodrop儀器檢測(cè)數(shù)據(jù)或者Agilent Bioanalyzer儀器檢測(cè)數(shù)據(jù)等;一般情況下,轉(zhuǎn)錄組測(cè)序需要Agilent Bioanalyzer儀器檢測(cè)獲得的總RNA 28S:18S≥1,RIN≥7;小RNA測(cè)測(cè)序不可采用常規(guī)柱式總RNA提取試劑盒,可選擇傳統(tǒng)總RNA提取法(如乙醇沉淀、異丙醇沉淀等)或者選用專門的小RNA提取試劑盒;寄送RNA樣品請(qǐng)置于1.5 ml離心管中,管上注明樣品名稱、濃度以及制備時(shí)間,管口使用Parafilm封口。在運(yùn)輸前將所有樣品管固定于50 ml帶蓋離心管中,再將50 ml管放在封口袋中。使用足量的干冰運(yùn)輸,并且盡量選用較快的郵遞方式,以降低運(yùn)輸過程中樣品降解的可能性。10xGenomics Chromium X多通道+高捕獲+10x的CellPlex多樣本混樣技術(shù)。宏全基因組高通量測(cè)序測(cè)序

通過顯微鏡使用血球計(jì)數(shù)板質(zhì)檢能觀察到懸液背景質(zhì)量和細(xì)胞數(shù)目及活性的評(píng)估。讓我們?cè)賮砘仡櫼幌屡_(tái)盼藍(lán)染色原理:臺(tái)盼藍(lán)染色原理:臺(tái)盼藍(lán)不能透過活細(xì)胞正常完整的細(xì)胞膜,故活細(xì)胞不被染色。而死細(xì)胞的細(xì)胞膜透性增高,可使染料進(jìn)入細(xì)胞內(nèi)而使死細(xì)胞染成淡藍(lán)色。怎樣通過血球計(jì)數(shù)板進(jìn)行質(zhì)檢操作呢?將血球計(jì)數(shù)板擦拭干凈,取干凈的蓋玻片蓋在計(jì)數(shù)板上;將細(xì)胞懸液混勻(或10μl臺(tái)盼藍(lán)+10μl細(xì)胞懸液),吸出10μl懸液至計(jì)數(shù)板上蓋玻片的一側(cè)使細(xì)胞核懸液鋪滿蓋玻片和計(jì)數(shù)板之間;在顯微鏡下分別對(duì)V1/V2/V3/V4四個(gè)計(jì)數(shù)區(qū)域進(jìn)行計(jì)數(shù);按細(xì)胞計(jì)數(shù)公式進(jìn)行計(jì)算,計(jì)算公式:細(xì)胞總數(shù)={(V1+V2+V3+V4)/4}*10000*懸液體積*稀釋倍數(shù),V1/V2/V3/V4為各個(gè)計(jì)數(shù)區(qū)的細(xì)胞數(shù)目,細(xì)胞活率=活細(xì)胞數(shù)目/總細(xì)胞數(shù)目*100%。上海市羥甲基化測(cè)序高通量測(cè)序服務(wù)生工生物已開展10x單細(xì)胞轉(zhuǎn)錄組測(cè)序(scRNA-seq)服務(wù),如果正好您有需要,那就快快來call我們吧!

對(duì)于微生物樣品,請(qǐng)客戶如實(shí)聲明所屬物種;對(duì)于可能致病的微生物,生工將拒收。以固體培養(yǎng)基培養(yǎng)的樣品,需將樣品從培養(yǎng)基上刮取下來,用干冰寄送;以液體培養(yǎng)基培養(yǎng)的樣品,需離心后棄培養(yǎng)液收集樣品,用RNA組織保存液(例如RNA-Be-Locker A)保存,以干冰或冰袋寄送;沒有RNA組織保存液的情況下,也可用液氮或干冰乙醇速凍,保存于-80°C 冰箱,埋于足量干冰寄送。***樣品送樣量需至少達(dá)到100 mg/樣;細(xì)菌樣品送樣量需至少達(dá)到107(10的7次方)數(shù)量級(jí),同時(shí),在與樣本一同寄送的送樣表上,標(biāo)明屬于革蘭氏陽性菌(G+)還是革蘭氏陰性菌(G-)。

使用顯微鏡進(jìn)行懸液質(zhì)檢操作時(shí)應(yīng)注意:1.使用血球計(jì)數(shù)板時(shí),可以提前鏡檢觀察每小格計(jì)數(shù)室內(nèi)是否潔凈無雜質(zhì)。若有雜質(zhì)灰層,則需要多次清洗,直至計(jì)數(shù)室潔凈無瑕;2.質(zhì)檢前將懸液輕微震蕩或使用擴(kuò)口gun頭吹打混勻;3.臺(tái)盼藍(lán)染色后需要盡快完成細(xì)胞計(jì)數(shù),一般建議不要超過10分鐘;4.如果方格中細(xì)胞數(shù)目過多,難以數(shù)清,應(yīng)當(dāng)對(duì)細(xì)胞懸液進(jìn)行稀釋以便于計(jì)數(shù);5.對(duì)于壓在方格界線上的細(xì)胞應(yīng)當(dāng)計(jì)數(shù)同側(cè)相鄰兩邊上的細(xì)胞數(shù),一般可采取“數(shù)上線不數(shù)下線,數(shù)左線不數(shù)右線”的原則處理,另兩邊不計(jì)數(shù)。于微生物樣品,請(qǐng)客戶如實(shí)聲明所屬物種,對(duì)于可能致病的微生物,生工保留拒收的權(quán)利。

轉(zhuǎn)錄組測(cè)序,項(xiàng)目介紹:RNA-Seq,是基于新一代測(cè)序技術(shù)的轉(zhuǎn)錄組學(xué)研究方法:首先提取生物樣品的全部轉(zhuǎn)錄的 RNA 并進(jìn)行 mRNA 富集,然后反轉(zhuǎn)錄為 cDNA 后進(jìn)行新一代高通量測(cè)序,在此基礎(chǔ)上進(jìn)行短片段拼接組裝,從而獲得一個(gè)個(gè)單獨(dú)轉(zhuǎn)錄本,進(jìn)而可以對(duì)該生物樣品當(dāng)前狀態(tài)的基因表達(dá)狀況有全局了解。對(duì)不同階段或部位生物樣品的轉(zhuǎn)錄組進(jìn)行 比較分析,則可以在轉(zhuǎn)錄層面得到基因表達(dá)水平的變化,針對(duì)關(guān)鍵基因則可以進(jìn)行代謝通路(Pathway)的構(gòu)建。X儀器本身有16個(gè)通道(Controller為8通道),每個(gè)通道極限多捕獲20000個(gè)細(xì)胞(Controller為10000個(gè)細(xì)胞) 。多重?cái)U(kuò)增高通量測(cè)序高通量

請(qǐng)寄送樣本(尤其是細(xì)胞樣本)之前鑒定樣本所屬物種。宏全基因組高通量測(cè)序測(cè)序

臺(tái)盼藍(lán)染色原理:臺(tái)盼藍(lán)染色原理:臺(tái)盼藍(lán)不能透過活細(xì)胞正常完整的細(xì)胞膜,故活細(xì)胞不被染色。而死細(xì)胞的細(xì)胞膜透性增高,可使染料進(jìn)入細(xì)胞內(nèi)而使死細(xì)胞染成淡藍(lán)色。

通過顯微鏡使用血球計(jì)數(shù)板質(zhì)檢得到質(zhì)檢結(jié)果:明場(chǎng)(細(xì)胞未染色):主要可以觀察懸液背景質(zhì)量(背景干凈,無雜質(zhì)碎片,無細(xì)胞團(tuán)塊);臺(tái)盼藍(lán)場(chǎng)(細(xì)胞與臺(tái)盼藍(lán)染色后):主要可以觀察活性(主要為活細(xì)胞,未染色藍(lán)色的為活細(xì)胞);通過臺(tái)盼藍(lán)場(chǎng)計(jì)算活率:90%>80%;細(xì)胞濃度:710cells/μl;等結(jié)果來看,血球計(jì)數(shù)板質(zhì)檢結(jié)果的展示可以看出所有指標(biāo)均符合上機(jī)標(biāo)準(zhǔn),屬于高質(zhì)量單細(xì)胞懸液。 宏全基因組高通量測(cè)序測(cè)序

生工生物工程(上海)股份有限公司是一家有著先進(jìn)的發(fā)展理念,先進(jìn)的管理經(jīng)驗(yàn),在發(fā)展過程中不斷完善自己,要求自己,不斷創(chuàng)新,時(shí)刻準(zhǔn)備著迎接更多挑戰(zhàn)的活力公司,在上海市等地區(qū)的醫(yī)藥健康中匯聚了大量的人脈以及**,在業(yè)界也收獲了很多良好的評(píng)價(jià),這些都源自于自身不努力和大家共同進(jìn)步的結(jié)果,這些評(píng)價(jià)對(duì)我們而言是比較好的前進(jìn)動(dòng)力,也促使我們?cè)谝院蟮牡缆飞媳3謯^發(fā)圖強(qiáng)、一往無前的進(jìn)取創(chuàng)新精神,努力把公司發(fā)展戰(zhàn)略推向一個(gè)新高度,在全體員工共同努力之下,全力拼搏將共同生工生物工程供應(yīng)和您一起攜手走向更好的未來,創(chuàng)造更有價(jià)值的產(chǎn)品,我們將以更好的狀態(tài),更認(rèn)真的態(tài)度,更飽滿的精力去創(chuàng)造,去拼搏,去努力,讓我們一起更好更快的成長!

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