上海SNP高通量測序應用

來源: 發(fā)布時間:2022-10-17

擴增子測序,項目介紹:隨著基因編輯技術(尤其是CRISPR-cas9技術)的發(fā)展,科研人員使用傳統(tǒng)的Sanger測序技術無法快速有效鑒定基因編輯效率。但是,通過對靶基因區(qū)域附近設計引物,進行PCR擴增,并對PCR產(chǎn)物進行高通量測序,可以快速高效的獲得目標區(qū)域的突變頻率信息,尤其是對低頻突變的檢測效果遠遠優(yōu)于一代測序,性價比極高。16S全長分類測序,項目介紹:16S全長測序分析主要是對 16S rRNA基因全長進行擴增,基于PacBio 測序平臺測序. 相比較二代測序只選擇 1-2 個高變區(qū)進行測序,三代可以獲得全長的 16S 序列,更多變異區(qū)信息可以提高物種鑒定的分辨率,還可以提高對于群落組成的鑒定的精度。另外,針對fungus/真核生物,也可以采用類似的辦法,擴增ITS/18S全長,進行物種分類測序,提高鑒定精度。Illumina HiSeq2500/4000 可以運行PE150/PE250模式。上海SNP高通量測序應用

真核/原核無參mRNA-Seq,項目介紹;測序使用Illumina Xten平臺,測序原始數(shù)據(jù)質(zhì)控后進行拼接,并進一步對拼接所得轉錄本進行功能注釋、CDD、CDS分析,SNP分析,SSR標記開發(fā)等分析。在計算基因的表達量后,進行基因表達差異及差異基因GO、KOG(原核生物為COG)、KEGG功能富集分析,KEGG pathway等分析。對于多個樣本,可進行重復相關性檢查、共表達分析、PCA主成分分析。另外,還可以進行基因功能互作、蛋白網(wǎng)絡互作等分析,深入研究基因功能,進一步揭示基因間互作網(wǎng)絡等信息,為研究網(wǎng)絡調(diào)控機理提供方向。 無參轉錄組高通量測序項目現(xiàn)在也有學者為了區(qū)分傳統(tǒng)測序和單細胞測序的區(qū)別,將傳統(tǒng)方法稱為批量測序。

簡化基因組測序,項目介紹:通過限制性內(nèi)切酶對基因組DNA進行酶切,并對酶切片段進行高通量測序,這種通過酶切降低基因組的復雜度的測序技術統(tǒng)稱為簡化基因 組測序技術。利用生物信息學方法,進行SNP單體型圖譜繪制,全基因組關聯(lián)分析(GWAS),連鎖分析和QTL定位分析,種群進化,主成分分析等。比較有代表性的方法有GBS-seq和RAD-seq。宏全基因組測序,項目介紹:宏基因組指特定環(huán)境樣品內(nèi)全部遺傳物質(zhì)的總和。直接提取環(huán)境樣品內(nèi)全部基因組DNA,隨后進行大規(guī)模高通量測序(shotgun 策 略)。測到數(shù)據(jù)后,先進行必要的數(shù)據(jù)質(zhì)控,而后進行基因組拼接、注釋(物種、基因功能),使得我們可以獲取環(huán)境樣品內(nèi)菌群分布、系統(tǒng)進化、功能代謝等信息。該方法已經(jīng)得到普遍的運用。

真核/原核有參mRNA-Seq,項目介紹:轉錄組(transcriptome)廣義上指某一生理條件下,細胞內(nèi)所有轉錄產(chǎn)物的gather,狹義上指所有mRNA的gather。轉錄組是研究基因表達的主要手段,是連接基因組遺傳信息與生物功能的蛋白質(zhì)組的紐帶。轉錄水平的調(diào)控是生物體重要的調(diào)控方式,通過轉錄組測序分析轉錄水平的調(diào)控,是目前運用較多的研究方式。測序使用Illumina Xten平臺,測序原始數(shù)據(jù)經(jīng)過質(zhì)控后,mapping至參考基因組序列,對mapping到基因上的reads進行計數(shù),計算基因的表達量后,進行基因表達差異及差異基因GO、KOG(原核生物為COG)、KEGG功能富集分析,KEGG pathway等分析。對于多個樣本,可進行重復相關性檢查、共表達分析、PCA主成分分析。另外,依據(jù)參考基因組,可進行諸如基因覆蓋度、測序飽和度等驗證性分析;可變剪切分析、SNP/InDel分析、新轉錄本預測以及聯(lián)合miRNA數(shù)據(jù)進行關聯(lián)分析等分析。另外,還可以進行基因功能互作、蛋白網(wǎng)絡互作等分析,深入研究基因功能,進一步揭示基因間互作網(wǎng)絡等信息,為研究網(wǎng)絡調(diào)控機理提供方向。ChIP項目至少要求50ng DNA,以Qubit 2.0檢測為準。其余具體咨詢生工高通量測序部。

懸液制備好后質(zhì)檢結果的判斷也是大家需要掌握的必備技能。單細胞懸液質(zhì)檢關卡究竟是怎樣運作的呢?單細胞懸液質(zhì)控要求:?細胞濃度:700-1200cells/μl;?細胞活率>80%(當細胞懸液活率低于70%時建議進行去除死細胞處理);細胞團及碎片雜質(zhì)<5%(無細胞粘連,無明顯的細胞碎片和細胞團,并保證細胞的完整性);?細胞狀態(tài):細胞直徑在7-40um之間(細胞直徑過大則建議進行抽核處理);?不存在逆轉錄抑制劑和非細胞的核酸分子。Life Ion torrentPGM 運行314、316、318芯片,可以承接擴增子測序、靶區(qū)域測序、基因組重測序服務。上海地區(qū)基因組高通量測序技術

組織材料樣品(提取RNA用)建議將標簽用膠帶貼到管壁,干冰運輸。上海SNP高通量測序應用

全轉錄組測序(Total RNA-Seq),項目介紹:全轉錄組是指特定細胞在特定狀態(tài)下所能轉錄出來的所有RNA的總和,包括mRNA和非編碼RNA(non-coding RNA)。針對非編碼RNA的研究主要集中在具有調(diào)控作用的miRNA,lncRNA和circRNA?;诙鷾y序技術的全轉錄組測序研究,同時分析同一樣本中的mRNA,lncRNA,circRNA和miRNA,并且通過關聯(lián)分析,使研究內(nèi)容更加系統(tǒng)化,致力于深入挖掘生命現(xiàn)象背后的轉錄調(diào)控問題。組織樣品或者總 RNA, 樣品名稱清晰,干冰運輸。上海SNP高通量測序應用

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