ITS高通量測(cè)序應(yīng)用

來源: 發(fā)布時(shí)間:2022-10-17

AO/PI染色原理:吖啶橙(AO)是一種小分子染料,可以通過完整的細(xì)胞膜,嵌入所有細(xì)胞(活細(xì)胞和死細(xì)胞)的細(xì)胞核,呈現(xiàn)綠色熒光;碘化丙啶(PI)只能通過不完整的細(xì)胞膜,即死細(xì)胞的細(xì)胞膜,嵌入所有死細(xì)胞的細(xì)胞核,呈現(xiàn)紅色熒光,通過標(biāo)記出的綠色熒光和紅色熒光就可以辨別出活細(xì)胞和死細(xì)胞,這種特異性染色的方法也可以排除無核細(xì)胞、雜質(zhì)、碎片等的干擾。熒光細(xì)胞計(jì)數(shù)儀檢測(cè)結(jié)果可以讓我們直觀的看到:細(xì)胞濃度(總細(xì)胞,活細(xì)胞,死細(xì)胞)、細(xì)胞存活率(臺(tái)盼藍(lán)和雙熒光AO/PI染色)、細(xì)胞平均直徑、細(xì)胞聚團(tuán)率、細(xì)胞直徑分布等結(jié)果的展示。生工高通量測(cè)序部擁有豐富的樣品處理經(jīng)驗(yàn),日均處理樣品200余例。ITS高通量測(cè)序應(yīng)用

真核/原核有參mRNA-Seq,項(xiàng)目介紹:轉(zhuǎn)錄組(transcriptome)廣義上指某一生理?xiàng)l件下,細(xì)胞內(nèi)所有轉(zhuǎn)錄產(chǎn)物的gather,狹義上指所有mRNA的gather。轉(zhuǎn)錄組是研究基因表達(dá)的主要手段,是連接基因組遺傳信息與生物功能的蛋白質(zhì)組的紐帶。轉(zhuǎn)錄水平的調(diào)控是生物體重要的調(diào)控方式,通過轉(zhuǎn)錄組測(cè)序分析轉(zhuǎn)錄水平的調(diào)控,是目前運(yùn)用較多的研究方式。測(cè)序使用Illumina Xten平臺(tái),測(cè)序原始數(shù)據(jù)經(jīng)過質(zhì)控后,mapping至參考基因組序列,對(duì)mapping到基因上的reads進(jìn)行計(jì)數(shù),計(jì)算基因的表達(dá)量后,進(jìn)行基因表達(dá)差異及差異基因GO、KOG(原核生物為COG)、KEGG功能富集分析,KEGG pathway等分析。對(duì)于多個(gè)樣本,可進(jìn)行重復(fù)相關(guān)性檢查、共表達(dá)分析、PCA主成分分析。另外,依據(jù)參考基因組,可進(jìn)行諸如基因覆蓋度、測(cè)序飽和度等驗(yàn)證性分析;可變剪切分析、SNP/InDel分析、新轉(zhuǎn)錄本預(yù)測(cè)以及聯(lián)合miRNA數(shù)據(jù)進(jìn)行關(guān)聯(lián)分析等分析。另外,還可以進(jìn)行基因功能互作、蛋白網(wǎng)絡(luò)互作等分析,深入研究基因功能,進(jìn)一步揭示基因間互作網(wǎng)絡(luò)等信息,為研究網(wǎng)絡(luò)調(diào)控機(jī)理提供方向。上海基因組高通量測(cè)序生物信息分析經(jīng)驗(yàn)豐富,可以滿足客戶標(biāo)準(zhǔn)分析到定制分析作圖的需求。

臺(tái)盼藍(lán)染色原理:臺(tái)盼藍(lán)染色原理:臺(tái)盼藍(lán)不能透過活細(xì)胞正常完整的細(xì)胞膜,故活細(xì)胞不被染色。而死細(xì)胞的細(xì)胞膜透性增高,可使染料進(jìn)入細(xì)胞內(nèi)而使死細(xì)胞染成淡藍(lán)色。

通過顯微鏡使用血球計(jì)數(shù)板質(zhì)檢得到質(zhì)檢結(jié)果:明場(chǎng)(細(xì)胞未染色):主要可以觀察懸液背景質(zhì)量(背景干凈,無雜質(zhì)碎片,無細(xì)胞團(tuán)塊);臺(tái)盼藍(lán)場(chǎng)(細(xì)胞與臺(tái)盼藍(lán)染色后):主要可以觀察活性(主要為活細(xì)胞,未染色藍(lán)色的為活細(xì)胞);通過臺(tái)盼藍(lán)場(chǎng)計(jì)算活率:90%>80%;細(xì)胞濃度:710cells/μl;等結(jié)果來看,血球計(jì)數(shù)板質(zhì)檢結(jié)果的展示可以看出所有指標(biāo)均符合上機(jī)標(biāo)準(zhǔn),屬于高質(zhì)量單細(xì)胞懸液。

對(duì)于微生物樣品,請(qǐng)客戶如實(shí)聲明所屬物種;對(duì)于可能致病的微生物,生工將拒收。以固體培養(yǎng)基培養(yǎng)的樣品,需將樣品從培養(yǎng)基上刮取下來,用干冰寄送;以液體培養(yǎng)基培養(yǎng)的樣品,需離心后棄培養(yǎng)液收集樣品,用RNA組織保存液(例如RNA-Be-Locker A)保存,以干冰或冰袋寄送;沒有RNA組織保存液的情況下,也可用液氮或干冰乙醇速凍,保存于-80°C 冰箱,埋于足量干冰寄送。***樣品送樣量需至少達(dá)到100 mg/樣;細(xì)菌樣品送樣量需至少達(dá)到107(10的7次方)數(shù)量級(jí),同時(shí),在與樣本一同寄送的送樣表上,標(biāo)明屬于革蘭氏陽(yáng)性菌(G+)還是革蘭氏陰性菌(G-)。近年來,隨著高通量測(cè)序技術(shù)的發(fā)展和普及,單細(xì)胞測(cè)序技術(shù)發(fā)展十分迅速。

KBSeq全質(zhì)粒測(cè)序跟一代測(cè)序相比有什么優(yōu)點(diǎn)呢?一代測(cè)序:1.數(shù)據(jù)質(zhì)量,套峰,雙峰等情況,需要人工分析校對(duì)。2.測(cè)序長(zhǎng)度,1 kb。3.成本,低。4.樣本用量,100 ng。5.精確度,70-90%。6.測(cè)序能力,需要測(cè)序引物,只能測(cè)測(cè)序引物間的片段序列。7.通量低,(與讀長(zhǎng)有關(guān))。8.實(shí)驗(yàn)周期,如果片段長(zhǎng)度超過5K,測(cè)通可能需要15天左右。對(duì)于測(cè)序長(zhǎng)度較長(zhǎng),如果我們用Sanger測(cè)序往往需要花費(fèi)大量的時(shí)間,而我們KBSeq全質(zhì)粒測(cè)序則只需要5-7天,就可以測(cè)通片段長(zhǎng)度小于30kb以下的片段。KBSeq全質(zhì)粒測(cè)序?qū)τ跇颖镜牧?,要求的也比較少,比如質(zhì)粒我們的樣本要求DNA的濃度需≥ 1 ng/μl, 體積需≥5 μl,如果比較珍貴的樣本或者是樣本比較難提取的,KBSeq就更為適合了。準(zhǔn)確、迅速,可以說是KBSeq的代名詞了。上海地區(qū)基因組高通量測(cè)序原理

生工生物接受客戶自備文庫(kù)測(cè)序項(xiàng)目。ITS高通量測(cè)序應(yīng)用

擴(kuò)增子測(cè)序,項(xiàng)目介紹:隨著基因編輯技術(shù)(尤其是CRISPR-cas9技術(shù))的發(fā)展,科研人員使用傳統(tǒng)的Sanger測(cè)序技術(shù)無法快速有效鑒定基因編輯效率。但是,通過對(duì)靶基因區(qū)域附近設(shè)計(jì)引物,進(jìn)行PCR擴(kuò)增,并對(duì)PCR產(chǎn)物進(jìn)行高通量測(cè)序,可以快速高效的獲得目標(biāo)區(qū)域的突變頻率信息,尤其是對(duì)低頻突變的檢測(cè)效果遠(yuǎn)遠(yuǎn)優(yōu)于一代測(cè)序,性價(jià)比極高。16S全長(zhǎng)分類測(cè)序,項(xiàng)目介紹:16S全長(zhǎng)測(cè)序分析主要是對(duì) 16S rRNA基因全長(zhǎng)進(jìn)行擴(kuò)增,基于PacBio 測(cè)序平臺(tái)測(cè)序. 相比較二代測(cè)序只選擇 1-2 個(gè)高變區(qū)進(jìn)行測(cè)序,三代可以獲得全長(zhǎng)的 16S 序列,更多變異區(qū)信息可以提高物種鑒定的分辨率,還可以提高對(duì)于群落組成的鑒定的精度。另外,針對(duì)fungus/真核生物,也可以采用類似的辦法,擴(kuò)增ITS/18S全長(zhǎng),進(jìn)行物種分類測(cè)序,提高鑒定精度。ITS高通量測(cè)序應(yīng)用

生工生物工程(上海)股份有限公司是一家有著先進(jìn)的發(fā)展理念,先進(jìn)的管理經(jīng)驗(yàn),在發(fā)展過程中不斷完善自己,要求自己,不斷創(chuàng)新,時(shí)刻準(zhǔn)備著迎接更多挑戰(zhàn)的活力公司,在上海市等地區(qū)的醫(yī)藥健康中匯聚了大量的人脈以及**,在業(yè)界也收獲了很多良好的評(píng)價(jià),這些都源自于自身不努力和大家共同進(jìn)步的結(jié)果,這些評(píng)價(jià)對(duì)我們而言是比較好的前進(jìn)動(dòng)力,也促使我們?cè)谝院蟮牡缆飞媳3謯^發(fā)圖強(qiáng)、一往無前的進(jìn)取創(chuàng)新精神,努力把公司發(fā)展戰(zhàn)略推向一個(gè)新高度,在全體員工共同努力之下,全力拼搏將共同生工生物工程供應(yīng)和您一起攜手走向更好的未來,創(chuàng)造更有價(jià)值的產(chǎn)品,我們將以更好的狀態(tài),更認(rèn)真的態(tài)度,更飽滿的精力去創(chuàng)造,去拼搏,去努力,讓我們一起更好更快的成長(zhǎng)!

標(biāo)簽: 高通量測(cè)序