上海市宏基因組高通量測序應用

來源: 發(fā)布時間:2022-10-21

單細胞轉(zhuǎn)錄組測序中,制備高質(zhì)量的單細胞懸液至關重要。而懸液制備好后質(zhì)檢結(jié)果的判斷也是大家需要掌握的必備技能。單細胞懸液質(zhì)檢關卡究竟是怎樣運作的呢?單細胞懸液質(zhì)控要求:?細胞濃度:700-1200cells/μl;?細胞活率>80%(當細胞懸液活率低于70%時建議進行去除死細胞處理);細胞團及碎片雜質(zhì)<5%(無細胞粘連,無明顯的細胞碎片和細胞團,并保證細胞的完整性);?細胞狀態(tài):細胞直徑在7-40um之間(細胞直徑過大則建議進行抽核處理);?不存在逆轉(zhuǎn)錄抑制劑和非細胞的核酸分子。DNA樣品請用1.5 mL離心管裝好并用封口膜封好,并安置于50 mL離心管內(nèi)或其他類似容器里,并旋緊蓋子。上海市宏基因組高通量測序應用

使用顯微鏡進行懸液質(zhì)檢操作時應注意:1.使用血球計數(shù)板時,可以提前鏡檢觀察每小格計數(shù)室內(nèi)是否潔凈無雜質(zhì)。若有雜質(zhì)灰層,則需要多次清洗,直至計數(shù)室潔凈無瑕;2.質(zhì)檢前將懸液輕微震蕩或使用擴口gun頭吹打混勻;3.臺盼藍染色后需要盡快完成細胞計數(shù),一般建議不要超過10分鐘;4.如果方格中細胞數(shù)目過多,難以數(shù)清,應當對細胞懸液進行稀釋以便于計數(shù);5.對于壓在方格界線上的細胞應當計數(shù)同側(cè)相鄰兩邊上的細胞數(shù),一般可采取“數(shù)上線不數(shù)下線,數(shù)左線不數(shù)右線”的原則處理,另兩邊不計數(shù)。上?;蚪M高通量測序平臺單細胞測序到底是什么?

怎樣通過血球計數(shù)板進行質(zhì)檢操作呢?將血球計數(shù)板擦拭干凈,取干凈的蓋玻片蓋在計數(shù)板上;將細胞懸液混勻(或10μl臺盼藍+10μl細胞懸液),吸出10μl懸液至計數(shù)板上蓋玻片的一側(cè)使細胞核懸液鋪滿蓋玻片和計數(shù)板之間;在顯微鏡下分別對V1/V2/V3/V4四個計數(shù)區(qū)域進行計數(shù);按細胞計數(shù)公式進行計算,計算公式:細胞總數(shù)={(V1+V2+V3+V4)/4}*10000*懸液體積*稀釋倍數(shù),V1/V2/V3/V4為各個計數(shù)區(qū)的細胞數(shù)目,細胞活率=活細胞數(shù)目/總細胞數(shù)目*100%。

轉(zhuǎn)錄組測序,項目介紹:RNA-Seq,是基于新一代測序技術的轉(zhuǎn)錄組學研究方法:首先提取生物樣品的全部轉(zhuǎn)錄的 RNA 并進行 mRNA 富集,然后反轉(zhuǎn)錄為 cDNA 后進行新一代高通量測序,在此基礎上進行短片段拼接組裝,從而獲得一個個單獨轉(zhuǎn)錄本,進而可以對該生物樣品當前狀態(tài)的基因表達狀況有全局了解。對不同階段或部位生物樣品的轉(zhuǎn)錄組進行 比較分析,則可以在轉(zhuǎn)錄層面得到基因表達水平的變化,針對關鍵基因則可以進行代謝通路(Pathway)的構(gòu)建。高通量測序技術是可以平行對數(shù)百萬甚至數(shù)十億條序列測序的技術。

懸液制備好后質(zhì)檢結(jié)果的判斷也是大家需要掌握的必備技能。單細胞懸液質(zhì)檢關卡究竟是怎樣運作的呢?單細胞懸液質(zhì)控要求:?細胞濃度:700-1200cells/μl;?細胞活率>80%(當細胞懸液活率低于70%時建議進行去除死細胞處理);細胞團及碎片雜質(zhì)<5%(無細胞粘連,無明顯的細胞碎片和細胞團,并保證細胞的完整性);?細胞狀態(tài):細胞直徑在7-40um之間(細胞直徑過大則建議進行抽核處理);?不存在逆轉(zhuǎn)錄抑制劑和非細胞的核酸分子。什么是KBSeq全質(zhì)粒測序?多重擴增高通量測序NGS

KBSeq全質(zhì)粒測序只能測菌液和質(zhì)粒,像PCR產(chǎn)物什么的還是送一代測序吧。上海市宏基因組高通量測序應用

土壤樣本請置于2 mL離心管里(多準備幾管備用),為保護樣本管,樣本管置于保護用的50 mL離心管或其他類似容器里,并旋緊蓋子;如常溫采的樣品,可以采用藍冰運輸;如果是高溫發(fā)酵罐或者樣品已經(jīng)凍存-80°C,需要用足量干冰運輸; DNA樣品請用1.5 mL離心管裝好并用封口膜封好,并安置于50 mL離心管內(nèi)或其他類似容器里,并旋緊蓋子;藍冰運輸;RNA樣品請用1.5 mL離心管裝好并用封口膜封好,并安置于50 mL離心管內(nèi)或其他類似容器里,并旋緊蓋子;用足量干冰運輸。 上海市宏基因組高通量測序應用

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