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AO/PI染色原理:吖啶橙(AO)是一種小分子染料,可以通過(guò)完整的細(xì)胞膜,嵌入所有細(xì)胞(活細(xì)胞和死細(xì)胞)的細(xì)胞核,呈現(xiàn)綠色熒光;碘化丙啶(PI)只能通過(guò)不完整的細(xì)胞膜,即死細(xì)胞的細(xì)胞膜,嵌入所有死細(xì)胞的細(xì)胞核,呈現(xiàn)紅色熒光,通過(guò)標(biāo)記出的綠色熒光和紅色熒光就可以辨別出活細(xì)胞和死細(xì)胞,這種特異性染色的方法也可以排除無(wú)核細(xì)胞、雜質(zhì)、碎片等的干擾。熒光細(xì)胞計(jì)數(shù)儀檢測(cè)結(jié)果可以讓我們直觀的看到:細(xì)胞濃度(總細(xì)胞,活細(xì)胞,死細(xì)胞)、細(xì)胞存活率(臺(tái)盼藍(lán)和雙熒光AO/PI染色)、細(xì)胞平均直徑、細(xì)胞聚團(tuán)率、細(xì)胞直徑分布等結(jié)果的展示。ChIP項(xiàng)目至少要求50ng DNA,以Qubit 2.0檢測(cè)為準(zhǔn)。其余具體咨詢生工高通量測(cè)序部。多重?cái)U(kuò)增高通量測(cè)序平臺(tái)
高通量測(cè)序技術(shù)是可以平行對(duì)數(shù)百萬(wàn)甚至數(shù)十億條序列測(cè)序的技術(shù)。在基因組測(cè)序、轉(zhuǎn)錄組測(cè)序、宏基因組測(cè)序、表觀遺傳測(cè)序、外顯子捕獲測(cè)序、靶區(qū)域測(cè)序等諸多科研及精細(xì)醫(yī)療檢測(cè)領(lǐng)域內(nèi)有普遍的運(yùn)用。生工生物工程(上海)股份有限公司自2011年成立高通量測(cè)序部以來(lái),逐步引進(jìn)了Illumina,Life,PacBio等二代/三代測(cè)序平臺(tái)。建立了2000m2高標(biāo)準(zhǔn)實(shí)驗(yàn)室(通過(guò)了國(guó)家ISO認(rèn)證)以及10PB級(jí)運(yùn)算能力的服務(wù)器集群,能滿足絕大多數(shù)科研客戶的研究需要。同時(shí),生工高通量測(cè)序團(tuán)隊(duì)建設(shè)也在不斷完善中,目前有50余專(zhuān)職員工,其中高級(jí)技術(shù)人員以及高級(jí)生物信息工程師占比50%以上,5年來(lái),通過(guò)生工高通量測(cè)序結(jié)果發(fā)表的文章累計(jì)影響因子超過(guò)1000分以上。上海地區(qū)多重PCR高通量測(cè)序原理生工一直秉持只要生工已經(jīng)標(biāo)準(zhǔn)化的分析內(nèi)容(以生工分析報(bào)告模板為準(zhǔn)),全部無(wú)費(fèi)用。
生工CHIP-Seq,項(xiàng)目介紹:CHIP-SEQ 技術(shù),即染色質(zhì)免疫共沉淀與高通量測(cè)序相結(jié)合的技術(shù)。它是研究體內(nèi)蛋白質(zhì)與DNA 相互作用的有力工具,還可以用來(lái)研究轉(zhuǎn)錄因子與基因表達(dá)的關(guān)系。通過(guò)高通量測(cè)序,可以一次性得到目的蛋白在整個(gè)基因組上的結(jié)合分布,得到目的蛋白精確的結(jié)合位點(diǎn)以及結(jié)合基序等信息。ChIP-Seq 的原理:首先通過(guò)染色質(zhì)免疫共沉淀技術(shù)(ChIP)特異性地富集目的蛋白結(jié)合的DNA 的所屬片段,并對(duì)其進(jìn)行純化與文庫(kù)構(gòu)建;然后對(duì)富集得到的DNA的片段進(jìn)行高通量測(cè)序,將獲得的數(shù)百萬(wàn)條序列標(biāo)簽精確定位到基因組上,從而獲得全基因組范圍內(nèi)與組蛋白、轉(zhuǎn)錄因子等互作的DNA 區(qū)段信息。
使用顯微鏡進(jìn)行懸液質(zhì)檢操作時(shí)應(yīng)注意:1.使用血球計(jì)數(shù)板時(shí),可以提前鏡檢觀察每小格計(jì)數(shù)室內(nèi)是否潔凈無(wú)雜質(zhì)。若有雜質(zhì)灰層,則需要多次清洗,直至計(jì)數(shù)室潔凈無(wú)瑕;2.質(zhì)檢前將懸液輕微震蕩或使用擴(kuò)口***頭吹打混勻;3.臺(tái)盼藍(lán)染色后需要盡快完成細(xì)胞計(jì)數(shù),一般建議不要超過(guò)10分鐘;4.如果方格中細(xì)胞數(shù)目過(guò)多,難以數(shù)清,應(yīng)當(dāng)對(duì)細(xì)胞懸液進(jìn)行稀釋以便于計(jì)數(shù);5.對(duì)于壓在方格界線上的細(xì)胞應(yīng)當(dāng)計(jì)數(shù)同側(cè)相鄰兩邊上的細(xì)胞數(shù),一般可采取“數(shù)上線不數(shù)下線,數(shù)左線不數(shù)右線”的原則處理,另兩邊不計(jì)數(shù)。RNA樣品建議用足量干冰運(yùn)輸。
生工外顯子測(cè)序,項(xiàng)目介紹:已知人類(lèi)基因組上有180000個(gè)外顯子,占整個(gè)基因組約1-2%。這些區(qū)域主要負(fù)責(zé)編碼蛋白。絕大多數(shù)的單基因遺傳突變與復(fù)雜疾病突變都發(fā)生在外顯子區(qū)域。相比于全基因組重測(cè) 序,全外顯子捕獲測(cè)序有測(cè)序深度高、價(jià)格便宜的優(yōu)勢(shì),性價(jià)比很高。生工生物采用Aglient SureSelect系列外顯子捕獲系統(tǒng),可以高效富集人全外顯子區(qū)域,并結(jié)合Illumina XTen測(cè)序平臺(tái)進(jìn)行深度測(cè)序。后期可以完成SNP/InDel/CNV等變異檢測(cè),形成完整的分析報(bào)告。小RNA測(cè)測(cè)序不可采用常規(guī)柱式總RNA提取試劑盒。全質(zhì)粒測(cè)序高通量測(cè)序公司
現(xiàn)在也有學(xué)者為了區(qū)分傳統(tǒng)測(cè)序和單細(xì)胞測(cè)序的區(qū)別,將傳統(tǒng)方法稱(chēng)為批量測(cè)序。多重?cái)U(kuò)增高通量測(cè)序平臺(tái)
簡(jiǎn)化基因組測(cè)序,項(xiàng)目介紹:通過(guò)限制性內(nèi)切酶對(duì)基因組DNA進(jìn)行酶切,并對(duì)酶切片段進(jìn)行高通量測(cè)序,這種通過(guò)酶切降低基因組的復(fù)雜度的測(cè)序技術(shù)統(tǒng)稱(chēng)為簡(jiǎn)化基因 組測(cè)序技術(shù)。利用生物信息學(xué)方法,進(jìn)行SNP單體型圖譜繪制,全基因組關(guān)聯(lián)分析(GWAS),連鎖分析和QTL定位分析,種群進(jìn)化,主成分分析等。比較有代表性的方法有GBS-seq和RAD-seq。宏全基因組測(cè)序,項(xiàng)目介紹:宏基因組指特定環(huán)境樣品內(nèi)全部遺傳物質(zhì)的總和。直接提取環(huán)境樣品內(nèi)全部基因組DNA,隨后進(jìn)行大規(guī)模高通量測(cè)序(shotgun 策 略)。測(cè)到數(shù)據(jù)后,先進(jìn)行必要的數(shù)據(jù)質(zhì)控,而后進(jìn)行基因組拼接、注釋?zhuān)ㄎ锓N、基因功能),使得我們可以獲取環(huán)境樣品內(nèi)菌群分布、系統(tǒng)進(jìn)化、功能代謝等信息。該方法已經(jīng)得到普遍的運(yùn)用。多重?cái)U(kuò)增高通量測(cè)序平臺(tái)
生工生物工程(上海)股份有限公司在同行業(yè)領(lǐng)域中,一直處在一個(gè)不斷銳意進(jìn)取,不斷制造創(chuàng)新的市場(chǎng)高度,多年以來(lái)致力于發(fā)展富有創(chuàng)新價(jià)值理念的產(chǎn)品標(biāo)準(zhǔn),在上海市等地區(qū)的醫(yī)藥健康中始終保持良好的商業(yè)口碑,成績(jī)讓我們喜悅,但不會(huì)讓我們止步,殘酷的市場(chǎng)磨煉了我們堅(jiān)強(qiáng)不屈的意志,和諧溫馨的工作環(huán)境,富有營(yíng)養(yǎng)的公司土壤滋養(yǎng)著我們不斷開(kāi)拓創(chuàng)新,勇于進(jìn)取的無(wú)限潛力,生工生物工程供應(yīng)攜手大家一起走向共同輝煌的未來(lái),回首過(guò)去,我們不會(huì)因?yàn)槿〉昧艘稽c(diǎn)點(diǎn)成績(jī)而沾沾自喜,相反的是面對(duì)競(jìng)爭(zhēng)越來(lái)越激烈的市場(chǎng)氛圍,我們更要明確自己的不足,做好迎接新挑戰(zhàn)的準(zhǔn)備,要不畏困難,激流勇進(jìn),以一個(gè)更嶄新的精神面貌迎接大家,共同走向輝煌回來(lái)!