上海市有參轉(zhuǎn)錄組高通量測序原理

來源: 發(fā)布時間:2022-10-21

RNA類高通量測序樣品要求:對于需要進(jìn)行 RNA 抽提的樣品,請使用新鮮取樣的實驗材料,當(dāng)場分成小塊(動物樣品厚度需小于0.5 cm,植物樣品厚度需小于0.3 cm)后立即用液氮或干冰乙醇速凍,保存于-80°C 冰箱,埋于足量的干冰(根據(jù)經(jīng)驗,在秋冬季節(jié),如果打包合適,5 公斤塊狀干冰可以維持 50 小時,而小塊的干冰能更好的包裹樣品,但需比塊狀干冰多加些)中用保溫箱寄送。一般組織樣品,送樣量至少200 mg/樣;如果樣品屬于孢子,送樣量至少500 mg/樣。一臺10xGenomics Chromium X儀器能夠在單次運行中分析數(shù)百至數(shù)十萬個細(xì)胞,讓百萬級的細(xì)胞研究變得常規(guī)。上海市有參轉(zhuǎn)錄組高通量測序原理

細(xì)胞質(zhì)檢時染料染色的原理:臺盼藍(lán)染色原理:臺盼藍(lán)不能透過活細(xì)胞正常完整的細(xì)胞膜,故活細(xì)胞不被染色。而死細(xì)胞的細(xì)胞膜透性增高,可使染料進(jìn)入細(xì)胞內(nèi)而使死細(xì)胞染成淡藍(lán)色。AO/PI染色原理:吖啶橙(AO)是一種小分子染料,可以通過完整的細(xì)胞膜,嵌入所有細(xì)胞(活細(xì)胞和死細(xì)胞)的細(xì)胞核,呈現(xiàn)綠色熒光;碘化丙啶(PI)只能通過不完整的細(xì)胞膜,即死細(xì)胞的細(xì)胞膜,嵌入所有死細(xì)胞的細(xì)胞核,呈現(xiàn)紅色熒光,通過標(biāo)記出的綠色熒光和紅色熒光就可以辨別出活細(xì)胞和死細(xì)胞,這種特異性染色的方法也可以排除無核細(xì)胞、雜質(zhì)、碎片等的干擾。羥甲基化測序高通量測序產(chǎn)品特別申明:不能采用過柱離心的方法提取總RNA。

核酸適配體測序,項目介紹:核酸適配體是一類能夠特異性地和靶物質(zhì)結(jié)合的寡核苷酸序列。它可作用于蛋白質(zhì)、金屬離子、小分子化合物、細(xì)胞膜表面受體等靶標(biāo)。其結(jié)合能力可與抗體相當(dāng)甚至更強(qiáng),同時具有低免疫原性、 穩(wěn)定性好等特點,并可結(jié)合各種藥物及載體構(gòu)建多元復(fù)合靶向給藥系統(tǒng)用于tumour靶向treat, 在生物醫(yī)學(xué)領(lǐng)域有潛在高價值。生工生物針對核酸適配體特殊結(jié)構(gòu),結(jié)合Illumina MiSeq測序平臺,可以快速對核酸適配體文庫進(jìn)行大規(guī)模高通量測序,省去克隆測序的麻煩,提高測序深度,快速計算適配體序列頻率,方便科研客戶快速評估序列富集程度。

對于細(xì)胞樣品,送樣量需達(dá)到 5 × 106(5乘10的6次方)數(shù)量級。富集后置于 2 ml Ep管中,用 1 ml TRIzol 重懸,注意取樣后立即用液氮或干冰乙醇速凍,保存于-80°C 冰箱,埋于足量的干冰中用保溫箱寄送。強(qiáng)烈建議細(xì)胞樣品先做細(xì)胞鑒定及支原體/衣原體污染之后,再送出來。對于血液樣本,只接收未凍存過的抗凝血新鮮樣本。抗凝劑不可使用肝素鈉,可用EDTA或ACD抗凝劑,取血后以冰袋保存,切記不能使血液凍結(jié),從取血之時開始計算,須在48小時之內(nèi)送達(dá)生工上??偛扛咄繙y序部。如果不能提供新鮮樣本,則請?zhí)峁难褐刑崛〉目俁NA樣本。備樣要求詳見B、RNA 樣品。DNA樣品請?zhí)峁╇娪灸z圖,濃度>20 ng/μl,總量一般1~2 μg。乙醇沉淀DNA或凍干DNA,可冰袋運輸,不超過3天。

怎樣通過血球計數(shù)板進(jìn)行質(zhì)檢操作呢?將血球計數(shù)板擦拭干凈,取干凈的蓋玻片蓋在計數(shù)板上;將細(xì)胞懸液混勻(或10μl臺盼藍(lán)+10μl細(xì)胞懸液),吸出10μl懸液至計數(shù)板上蓋玻片的一側(cè)使細(xì)胞核懸液鋪滿蓋玻片和計數(shù)板之間;在顯微鏡下分別對V1/V2/V3/V4四個計數(shù)區(qū)域進(jìn)行計數(shù);按細(xì)胞計數(shù)公式進(jìn)行計算,計算公式:細(xì)胞總數(shù)={(V1+V2+V3+V4)/4}*10000*懸液體積*稀釋倍數(shù),V1/V2/V3/V4為各個計數(shù)區(qū)的細(xì)胞數(shù)目,細(xì)胞活率=活細(xì)胞數(shù)目/總細(xì)胞數(shù)目*100%。10xGenomics Chromium X多通道+高捕獲+10x的CellPlex多樣本混樣技術(shù)。上海靶向捕獲高通量測序

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單細(xì)胞懸液質(zhì)檢方法,在進(jìn)行單細(xì)胞懸液質(zhì)檢時,需要用到以下兩大質(zhì)檢利器的輔助:熒光細(xì)胞計數(shù)儀(主要使用臺盼藍(lán)和雙熒光AO/PI染色法)進(jìn)行質(zhì)檢。首先我們先要了解一下細(xì)胞質(zhì)檢時染料染色的原理:臺盼藍(lán)染色原理:臺盼藍(lán)不能透過活細(xì)胞正常完整的細(xì)胞膜,故活細(xì)胞不被染色。而死細(xì)胞的細(xì)胞膜透性增高,可使染料進(jìn)入細(xì)胞內(nèi)而使死細(xì)胞染成淡藍(lán)色。熒光細(xì)胞計數(shù)儀檢測結(jié)果可以讓我們直觀的看到:細(xì)胞濃度(總細(xì)胞,活細(xì)胞,死細(xì)胞)、細(xì)胞存活率(臺盼藍(lán)和雙熒光AO/PI染色)、細(xì)胞平均直徑、細(xì)胞聚團(tuán)率、細(xì)胞直徑分布等結(jié)果的展示。上海市有參轉(zhuǎn)錄組高通量測序原理

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