酶解膠原蛋白的工藝主要分為單酶水解法和多酶水解法。多酶水解法又分為混合酶水解法（比如牛胰蛋白酶，鏈霉菌蛋白酶，芽孢桿菌蛋白酶混合）和分步酶水解法，酶法提取皮膠原具體實(shí)驗(yàn)工藝及條件的選取通常應(yīng)考慮要開發(fā)的產(chǎn)品對(duì)分子量的要求，要得到分子量較小的膠原多肽一般采用多酶水解法。影響酶解效果的因素主要有：酶的種類、加酶量、酶解溫度、酶解時(shí)間、pH值及料水比。采用酶法提取骨料中的膠原蛋白，既能有效縮短提取時(shí)間，又能獲得具有良好生物活性的膠原蛋白，而且對(duì)環(huán)境的污染也較小。膠原蛋白不易被普通蛋白酶水解，但能被動(dòng)物膠原酶斷裂，斷裂的碎片自動(dòng)變性后可被普通蛋白酶水解。胃蛋白酶水解膠原蛋白的適宜條件為～、溫度37℃。水解膠原蛋白和膠原多肽也并不相同，可以近似認(rèn)為是宏觀和微觀的關(guān)系。四川大豆膠原蛋白肽口服液
一級(jí)結(jié)構(gòu)是蛋白質(zhì)分子中氨基酸以肽鍵連接的順序，每一種蛋白質(zhì)分子，都有其特定的氨基酸組成和排列方式，由此就決定了不同的空間結(jié)構(gòu)和功能。蛋白質(zhì)分子中一級(jí)結(jié)構(gòu)關(guān)鍵部位氨基酸的改變，會(huì)直接影響其功能，這個(gè)關(guān)鍵部位就是蛋白質(zhì)分子的活性中心。已發(fā)現(xiàn)并確認(rèn)了不下30種類型的膠原蛋白。一般的蛋白質(zhì)是雙螺旋結(jié)構(gòu)，而作為細(xì)胞外基質(zhì)（ECM）的一種結(jié)構(gòu)蛋白，膠原蛋白由三條多肽鏈構(gòu)成三股螺旋結(jié)構(gòu)，或稱膠原域，即3條多肽鏈的每條都左旋形成左手螺旋結(jié)構(gòu)，再以氫鍵相互咬合形成牢固的右手超螺旋結(jié)構(gòu)。膠原特有的左旋a鏈相互纏繞構(gòu)成膠原的右手復(fù)合螺旋結(jié)構(gòu)，這一區(qū)段稱為螺旋區(qū)段，螺旋區(qū)段比較大特征是氨基酸呈現(xiàn)（Gly-X-Y）n周期性排列，其中X、Y位置為脯氨酸（PrO）和羥脯氨酸（Hyp），是膠原蛋白的特有氨基酸，約占25%，是各種蛋白質(zhì)中含量比較高的；膠原蛋白中存在的羥基賴氨酸（Hyl）在其它蛋白質(zhì)中不存在，它不是以現(xiàn)成的形式參與膠原的生物合成，而是從已經(jīng)合成的膠原的肽鏈中的脯氨酸（Pro）經(jīng)羥化酶作用轉(zhuǎn)化來的。而一般陸生哺乳動(dòng)物蛋白質(zhì)中羥脯氨酸和焦谷氨酸的含量極微少。與陸生動(dòng)物相比，水生動(dòng)物中的膠原蛋白，其脯氨酸和羥脯氨酸的總量少。吉林玻尿酸膠原蛋白固體飲料魚膠原蛋白的原材料，一般來源于魚類。
預(yù)處理除膠原蛋白外，動(dòng)物骨中還含有油脂、多種礦物質(zhì)和其他雜質(zhì)，因此在被用于提取膠原蛋白之前必須進(jìn)行預(yù)處理。先剔除動(dòng)物骨上殘留的肉質(zhì)和肌腱等雜物，粉碎后用正丁醇或正己烷萃取出骨油。現(xiàn)在除去骨中無機(jī)物以提高膠原蛋白的得率。除去骨中的礦物質(zhì)可用稀酸或EDTA溶液。有人用原料用5倍質(zhì)量的，用正乙烷脫脂后再用胃蛋白酶酶解，在加酶量150U/g，pH值，37℃條件下處理120min，然后在固液比1∶6的情況下抽提5h，在此條件下，提取率可達(dá)18%；還有人用EDTA溶液（）浸泡骨料5d，可有效脫去骨料中的羥基磷灰石。[87-89]膠原蛋白的提取一般有三種方法：一是高壓輔助的物理方法；二是用溶劑預(yù)處理結(jié)合低溫或熱水抽提的化學(xué)方法，根據(jù)溶劑的不同，可分為熱水浸提法、酸法、堿法、鹽法；三是用酶的生物化學(xué)法。一般來說，高壓輔助和熱水抽提針對(duì)明膠的提取，而低溫抽提和酶法針對(duì)膠原的提取，但其基本原理都是根據(jù)膠原蛋白的特性改變蛋白質(zhì)所在的外界環(huán)境，把膠原蛋白從其他蛋白質(zhì)中分離出來。
膠原蛋白的熱變性溫度可以通過測(cè)定膠原蛋白溶液增比黏度的變化來確定。其方法是將膠原蛋白樣品溶于一定量的緩沖溶液中，并配制成一定濃度的溶液，然后用烏式黏度計(jì)測(cè)量溶液在一定溫度區(qū)間內(nèi)保持一定時(shí)間后的增比黏度，以增比黏度對(duì)溫度作圖，當(dāng)增比黏度變化50%時(shí)所對(duì)應(yīng)的溫度即為熱變性溫度。熱變性溫度還可通過拉曼光譜和差示掃描量熱法等進(jìn)行測(cè)定。有人測(cè)得鱸魚、鯽魚和鳙魚魚皮膠原蛋白的熱變性溫度分別為25、27和30℃，它們的棲息水溫分別為26～27、29和32℃，亞氨基酸含量分別為、，與3種魚皮膠原的熱變性溫度相吻合Ⅱ型膠原和Ⅺ型膠原Ⅱ型膠原由三條α1肽鏈組成，即[α1(Ⅱ)]3，富含羥賴氨酸，并且糖化率高，含糖量可達(dá)4%，是軟骨中的主要膠原。另外，即使同一生物，皮和骨膠原蛋白的熱變形溫度也可能不一，像來自日本海鱸、鮐魚、大頭鯊和眼斑鲀的皮膠原蛋白的變性溫度為℃，而骨膠原蛋白的變性溫度則為℃。附帶結(jié)論是骨膠原蛋白的變性溫度范圍整體上比皮膠原蛋白的變性溫度范圍要高。而且骨膠原蛋白和皮膠原蛋白在不同pH時(shí)的溶解度不同。這表明皮和骨膠原蛋白的分子特性和構(gòu)型存在差異。膠原蛋白與膠原肽均具有保濕的作用。
以膠原蛋白為基質(zhì)作真皮輔以上皮成分構(gòu)成的組織工程人工皮膚藥物緩釋膠以膠原蛋白為主要成分的給藥系統(tǒng)應(yīng)用非常比較廣，可以把膠原蛋白水溶液塑造成各種形式的給藥系統(tǒng)，如眼科方面的膠原蛋白保護(hù)物、燒傷或創(chuàng)傷使用的膠原海綿、蛋白質(zhì)傳輸?shù)奈⒘?、膠原蛋白的凝膠形式、透過皮膚給藥的調(diào)控材料以及基因傳輸?shù)募{米微粒等。此外，還可作為組織工程包括細(xì)胞培養(yǎng)系統(tǒng)的基質(zhì)、人工血管和瓣膜的支架材料等。自體皮膚移植一直是治好二度和三度燒傷的全球標(biāo)準(zhǔn)方法，然而對(duì)于嚴(yán)重?zé)齻牟∪?，缺少合適的可移植的皮膚成了較嚴(yán)峻的問題，有人利用生物工程技術(shù)通過嬰兒皮膚細(xì)胞培育出嬰兒皮膚組織，這種膠原蛋白組織在沒有自體移植的情況下，在3周到18個(gè)月不等的時(shí)間里可治好不同程度的燒傷，而且新長(zhǎng)出的皮膚也很少表現(xiàn)出肥大增生和抗性。還有人用人工合成的聚-DL-乳酸-羥基乙酸（PLGA）和天然膠原蛋白來培育三維的人皮膚纖維原細(xì)胞，結(jié)果表明：細(xì)胞在合成網(wǎng)狀物上生長(zhǎng)更快，而且內(nèi)外幾乎同步生長(zhǎng)，增殖細(xì)胞和分泌的胞外基質(zhì)更均一，把這種纖維植入無皮的大鼠背部，2周后就長(zhǎng)出了真皮組織，4周后就長(zhǎng)出了上皮組織。膠原蛋白肽還具有其它許多特殊的生理功能。海鯛魚膠原蛋白固體飲料
只有攝入足夠的可與鈣結(jié)合的膠原蛋白，能較快的達(dá)到骨骼部位而沉積。四川大豆膠原蛋白肽口服液
膠原的相對(duì)分子質(zhì)量大，電泳圖有3條泳帶，在100kD附近出現(xiàn)的2條泳帶分別是膠原分子的α1鏈和α2鏈，在200kD附近出現(xiàn)的1條泳帶是膠原分子的β鏈。即膠原的每條多肽鏈相對(duì)分子質(zhì)量可達(dá)100kD，1個(gè)膠原分子相對(duì)分子質(zhì)量為300kD。多肽分子量的測(cè)定方法常用SDS-PAGE，凝膠色譜法以及質(zhì)譜法。有人采用凝膠過濾色譜法測(cè)定脫鉻革屑中膠原水解產(chǎn)物分子量分布在。飛行時(shí)間質(zhì)譜法測(cè)定比目魚皮膠原寡肽分子量的分布主要集中在～。動(dòng)物蛋白酶水解后的膠原多肽的分子量在2～7kD，比植物蛋白酶水解的膠原多肽分子量范圍更廣。膠原的熱穩(wěn)定性是指測(cè)定其在水系中纖維的熱收縮溫度（Ts），或溶液中分子的熱變性溫度（Td）。Ts和Td之差一般在20～25℃，而Ts值較Td值容易測(cè)定。Td還可以表示膠原螺旋被破壞的溫度，另外還與其亞氨基酸（脯氨酸和羥脯氨酸）的含量有關(guān)，尤其是羥脯氨酸含量，它們之間存在正相關(guān)，冷水性魚類的羥脯氨酸含量比較低，所以冷水性魚類膠原蛋白Td值明顯低于暖水性魚類，而又都低于陸生動(dòng)物。但魚皮膠原蛋白與魚肉膠原蛋白相比，其真皮的Td要比肌肉的低1℃左右，這與肌肉膠原中脯氨酸的羥基化率較真皮膠原高有關(guān)。有人測(cè)定了多種魚皮可溶性膠原蛋白的氨基酸組成。四川大豆膠原蛋白肽口服液
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