化學(xué)方法比物理方法改。聯(lián)度高,且能獲得均勻一致的交聯(lián),對調(diào)節(jié)、控制膠原的各性質(zhì)均有效。已廣泛應(yīng)用于各種化學(xué)試劑交聯(lián)膠原,以提高其交聯(lián)度、力學(xué)性能及生物相容性。化學(xué)改性法具體又可分為使用化學(xué)試劑交聯(lián)、側(cè)鏈的修飾、生理活性物的固定化三種方法。[130]化學(xué)試劑交聯(lián)法中常用的化學(xué)交聯(lián)劑有戊二醛、己異二氰酸酯、碳化二亞胺、疊氮二苯基磷等,其中戊二醛是應(yīng)用較比較廣的試劑,大量實驗證明:戊二醛能提供有效交聯(lián),但有細(xì)胞毒性,且其用量難以控制。另外,隨著交聯(lián)度的增加,吸水能力和膨脹度卻會降低。?;B氮化物、聚環(huán)氧化物或京尼平交聯(lián)等,不會引入明顯的毒性,且可獲得理想的交聯(lián)效果。所見報道中,多使用單一交聯(lián)劑對膠原蛋白交聯(lián)改性,但也有使用混合交聯(lián)劑的,如為了解決人工心臟瓣膜晚期鈣化問題,篩選出環(huán)氧丙烷化學(xué)改性戊二醛處理生物瓣的方法,可明顯減低瓣膜組織膠原蛋白末端游離羧基含量。動物實驗表明,經(jīng)改性后的瓣膜組織能保持較好的組織穩(wěn)定性和機械抗張強度、免疫原性測試為陰性,符合臨床應(yīng)用。 真皮中含有豐滿的膠原蛋白層,而補充膠原三肽,能更有效的將皮膚細(xì)胞撐起。廣東海鯛魚膠原蛋白
在實際提取過程中,不同提取方法之間往往相互結(jié)合,可以得到較好的提取效果。采用超高壓處理系統(tǒng)對原料給予高壓處理一段時間,使其組織結(jié)構(gòu)和膠原蛋白的三股螺旋結(jié)構(gòu)發(fā)生松弛、變性,便于分離提取。熱水提取法是將原料經(jīng)過除雜蛋白等前處理之后,在一定條件下直接用熱水浸提已經(jīng)變性了的膠原蛋白或膠原蛋白水解物,使用的溫度有100℃沸水浴、60-70℃、40-45℃。膠原蛋白的提取一般有三種方法:一是高壓輔助的物理方法;二是用溶劑預(yù)處理結(jié)合低溫或熱水抽提的化學(xué)方法,根據(jù)溶劑的不同,可分為熱水浸提法、酸法、堿法、鹽法;三是用酶的生物化學(xué)法。一般來說,高壓輔助和熱水抽提針對明膠的提取,而低溫抽提和酶法針對膠原的提取,但其基本原理都是根據(jù)膠原蛋白的特性改變蛋白質(zhì)所在的外界環(huán)境,把膠原蛋白從其他蛋白質(zhì)中分離出來。 遼寧膠原蛋白肽廠家膠原三肽更能有效的服務(wù)于人類的健康與美麗。
有人對海參膠原研究發(fā)現(xiàn),刺參體壁含蛋白,其中70%為膠原蛋白。氨基酸分析,膠原富含丙氨酸和羥脯氨酸,但羥賴氨酸含量較少,SDS電泳及SP凝膠柱分析發(fā)現(xiàn)其膠原組成為(α1)2α2。還有人從仿刺參()提取膠原蛋白,利用EDTA和Tris-HCl浸泡溶漲,用氫氧化鈉除去雜質(zhì)和非膠原蛋白,采用胃蛋白酶促溶提取粗制膠原,通過鹽析和透析獲取精致膠原蛋白,并進(jìn)一步利用SephacrylS-300HR凝膠過濾和DEAE-52陰離子交換除去多糖,獲取膠原蛋白純品。SDS-PAGE電泳表明膠原分子的組成為(α1)3,且α鏈類似于脊椎動物Ⅰ型膠原的α1鏈,熱收縮溫度為57℃,低于牛皮膠原5℃。還有人對采自日本Senzaki海灣的Stomolopusmeleagri水母的外傘組織進(jìn)行了分析。整個中膠層被分成三部分,利用醋酸首先將凍干的水母中膠層分為酸溶性蛋白和酸不溶性物質(zhì),利用NaCl溶液將酸溶性蛋白分為酸溶性膠原蛋白和酸溶性非膠原蛋白,而不溶入醋酸的中膠層經(jīng)胃蛋白酶處理后大多變?yōu)榭扇苄缘哪z原質(zhì)。然后利用氨基酸分析儀對分離得到的三部分的組成分別進(jìn)行分析。發(fā)現(xiàn)該水母外傘中膠原蛋白含量很高,大約占干重的。經(jīng)SDS聚丙烯酰胺凝膠電泳分析其膠原蛋白是由三個獨特α鏈組成。
堿法提取即利用一定濃度的堿在一定的外界條件下提取膠原蛋白,堿處理法中常用的處理劑為石灰、氫氧化鈉、碳酸鈉等,用氫氧化鈉浸提時效果較好。一般的是把樣品勻漿后,用堿溶液多次溶脹后,再離心提取。但由于易引起蛋白質(zhì)變性,如膠原肽鍵水解,含羥基、疏基的氨基酸全部被破壞;所得產(chǎn)物等電點pH值較低,天冬酞胺和谷氨酞胺分別轉(zhuǎn)變?yōu)樘於彼岷凸劝彼?,得到的水解產(chǎn)物分子量較在酸性溶液中比低等問題,若比較嚴(yán)重的話,還會產(chǎn)生D、L-型氨基酸消旋混合物,若D型氨基酸含量高過L型氨基酸,則會抑制L-型氨基酸的吸收,有些D型氨基酸有毒,甚至有致ai、致畸和致突變的作用。而且堿法提取的含量較低,用氫氧化鈉從魷魚皮中提取堿溶性膠原蛋白,其得率只有3%(以濕基計)。所以,若想提取結(jié)構(gòu)完整、使用安全的膠原蛋白,很少采用此方法。有關(guān)單獨采用堿法提取膠原蛋白的報道不多,一般是堿法提取和酸法提法結(jié)合使用。比如在4℃條件下,魚骨用,再用,用10%的異丙醇溶液去除脂肪,,現(xiàn)在得到無色無味的膠原蛋白,提取率為。 所以是各國女性較為認(rèn)可的魚類膠原蛋白。
膠原蛋白亦可用于食品,早在十二世紀(jì)Bingen的,在相當(dāng)長的一段時間里,含膠原的一些產(chǎn)品被人們認(rèn)為對關(guān)節(jié)是很有益處的。因為它具有適用于食品的一些屬性:食用級通常外觀為白色,口感柔和,味道清淡,易消化??梢越档脱视腿ズ湍懝檀迹⒖梢栽龈唧w內(nèi)某些缺乏的必需微量元素使之維持在一個相對的正常范圍之內(nèi),它是一種理想的降血脂食品。此外,有研究表明,膠原蛋白可以協(xié)助排除體內(nèi)的鋁,減少鋁在體內(nèi)的聚集,降低鋁質(zhì)對人體的危害,并一定程度上促進(jìn)指甲和頭發(fā)的生長。Ⅱ型膠原是關(guān)節(jié)軟骨中的主要蛋白,因而是潛在的自身抗原??诜竽苷T導(dǎo)T細(xì)胞產(chǎn)生免疫耐受,從而抑制T細(xì)胞介導(dǎo)的自身免疫性疾病。膠原多肽是膠原或明膠經(jīng)蛋白酶等降解處理后制得的具有較高消化吸收性、分子量約為2000~30000的產(chǎn)物,不具有明膠的凝膠性能,市場上銷售的膠原多為膠原多肽。 膠原三肽的用途化妝品中的作用保濕、滋養(yǎng)、亮膚、緊膚、防皺、修復(fù)。廣東深海鱈魚膠原蛋白肽原液
需要的膠原蛋白,其實是一種由3個氨基酸分子組成的膠原蛋白即“膠原三肽”。廣東海鯛魚膠原蛋白
酶法提取是指可溶性膠原和酸溶性膠原被提取后,需用一些蛋白酶,如膠原酶、胃蛋白酶、木瓜蛋白酶和胰凝乳蛋白酶等水解,得到不同的酶促溶性膠原蛋白。所使用的蛋白酶主要分3種:動物蛋白酶(如胰蛋白酶,胃蛋白酶),植物蛋白酶(如木瓜蛋白酶,菠蘿蛋白酶),微生物蛋白酶(如堿性蛋白酶,中性蛋白酶)。在對酶法水解膠原蛋白的研究中,以堿性蛋白酶應(yīng)用較多。將膠原進(jìn)行限制性降解,即將末端肽切割下來,由于膠原肽鏈間的共價鍵都是通過分子末端肽里的賴氨酸或羥賴氨酸的相互作用形成的,末端肽被切下后,含三螺旋結(jié)構(gòu)的主體部分可溶于稀有機酸而被提取出來。用酶處理,可以水解掉膠原纖維蛋白的末端肽,提高膠原蛋白的產(chǎn)率;而且還不會破壞膠原蛋白的三股螺旋結(jié)構(gòu),保持其特性。影響酶提取的因素有很多,如酶濃度、酶與底物的比例、酶解時間、酶解溫度、pH值以及料液比等。在實際操作中,大多數(shù)采用酶復(fù)合法提取膠原蛋白,較多的是使用胃蛋白酶提取,有機酸多為乙酸。 廣東海鯛魚膠原蛋白
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