福建什么是免疫組化

來(lái)源: 發(fā)布時(shí)間:2021-10-21

免疫組化結(jié)果背景染色較深的原因有哪些?

 (1)抗體濃度過(guò)高:一抗?jié)舛冗^(guò)高是常見(jiàn)的原因之一。解決辦法是,每次使用新抗體前應(yīng)當(dāng)對(duì)其工作濃度進(jìn)行測(cè)試,使每一抗體個(gè)體化,找到適合自己實(shí)驗(yàn)室的理想工作濃度,既使是即用型的抗體也應(yīng)如此,不能只簡(jiǎn)單的按說(shuō)明書(shū)進(jìn)行染色。

(2)抗體孵育時(shí)間過(guò)長(zhǎng)或溫度較高:解決辦法是,嚴(yán)格執(zhí)行操作規(guī)程,比較好隨身佩帶報(bào)時(shí)表或報(bào)時(shí)鐘,及時(shí)提醒,避免因遺忘而造成時(shí)間延長(zhǎng)。現(xiàn)在流行的二步法(Polymer)敏感性很高,要求一抗孵育的時(shí)間不是傳統(tǒng)的1小時(shí),而是30分鐘,因此,要根據(jù)染色結(jié)果進(jìn)行調(diào)整。 

(3)DAB變質(zhì)和顯色時(shí)間太長(zhǎng):DAB比較好現(xiàn)用現(xiàn)配,如有沉渣應(yīng)進(jìn)行過(guò)濾后再用。配制好的DAB不應(yīng)存放時(shí)間太長(zhǎng),因?yàn)樵跊](méi)有酶的情況下,過(guò)氧化氫也會(huì)游離出氧原子與DAB產(chǎn)生反應(yīng)而降低DAB的效力,未用完的DAB存放在冰箱里幾天后再用這種似乎節(jié)約的辦法是不可取的。DAB的顯色比較好在顯微鏡下監(jiān)控,達(dá)到理想的染色程度時(shí)立即終止反應(yīng)。但是當(dāng)染**太多時(shí)或用染色機(jī)時(shí),這樣做似乎不現(xiàn)實(shí),但至少應(yīng)對(duì)一些新的或少用的抗體顯色時(shí)進(jìn)行監(jiān)控,避免顯色時(shí)間過(guò)長(zhǎng)。

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免疫組化分類中,免疫熒光方法,英瀚斯生物為您進(jìn)行介紹。一開(kāi)始建立的免疫組織化學(xué)技術(shù)。它利用抗原抗體特異性結(jié)合的原理,先將已知抗體標(biāo)上熒光素,以此作為探針檢查細(xì)胞或組織內(nèi)的相應(yīng)抗原,在熒光顯微鏡下觀察。當(dāng)抗原抗體復(fù)合物中的熒光素受激發(fā)光的照射后即會(huì)發(fā)出一定波長(zhǎng)的熒光,從而可確定組織中某種抗原的定位,進(jìn)而還可進(jìn)行定量分析。由于免疫熒光技術(shù)特異性強(qiáng)、靈敏度高、快速簡(jiǎn)便,所以在臨床病理診斷、檢驗(yàn)中應(yīng)用比較廣。安徽組織免疫組化價(jià)格免疫組化的那些小知識(shí),都在這里!

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免疫組化實(shí)驗(yàn)所用的抗體

免疫組化實(shí)驗(yàn)中常用的抗體為單克隆抗體和多克隆抗體。單克隆抗體是一個(gè)B淋巴細(xì)胞克隆分泌的抗體,應(yīng)用細(xì)胞融合雜交瘤技術(shù)免疫動(dòng)物制備。多克隆抗體是將純化后的抗原直接免疫動(dòng)物后,從動(dòng)物血中所獲得的免疫血清,是多個(gè)B淋巴細(xì)胞克隆所產(chǎn)生的抗體混合物。

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免疫組化常用的染色方法

根據(jù)標(biāo)記物的不同分為免疫熒光法,免疫酶標(biāo)法,親和組織化學(xué)法,后者是以一種物質(zhì)對(duì)某種組織成分具有高度親合力為基礎(chǔ)的檢測(cè)方法。這種方法敏感性更高,有利于微量抗原(抗體)在細(xì)胞或亞細(xì)胞水平的定位,其中生物素—抗生物素染色法常用。

免疫組化的局限性,可能會(huì)有假陽(yáng)性。陽(yáng)性信號(hào)定位不正確即為假陽(yáng)性,包括著色不勻、背景著色、邊緣效應(yīng),另外組織的某些特定成分也能導(dǎo)致假陽(yáng)性結(jié)果。假陽(yáng)性可能的原因有:(1)一抗?jié)舛燃耙豢故欠袷В贵w有一個(gè)合適的濃度范圍且必須在有效期內(nèi)使用,過(guò)期的抗體或者不著色,或者背景著色,形成假陽(yáng)性;(2)試劑未充分覆蓋組織,組織邊緣的試劑易干濃度較組織中間高致深染;(3)抗體孵育時(shí)間過(guò)長(zhǎng),由于室溫的影響夏季孵育時(shí)間稍短,冬季孵育時(shí)間稍長(zhǎng);(4)操作過(guò)程中組織變干,造成組織邊緣收縮或損壞形成偽影,產(chǎn)生假陽(yáng)性;(5)3,3'-二氨基聯(lián)苯胺(DAB)顯色時(shí)間太長(zhǎng),DAB宜現(xiàn)配現(xiàn)用,配制時(shí)間比較好在30min以內(nèi);(6)由于胞漿里含有較多的蛋白質(zhì),因此間質(zhì)和胞漿中出現(xiàn)很多非特異性的染色,如內(nèi)源性酶血紅蛋白、肌紅蛋白等造成的著色,可以通過(guò)血清封閉解決;乳腺cancer組織中的脂肪細(xì)胞、淋巴細(xì)胞也會(huì)產(chǎn)生非特異性的染色;(7)非特異性抗體吸附常見(jiàn)于壞死組織中,使壞死組織呈較高的背景染色,在免疫組化中應(yīng)避免選擇壞死組織較多的蠟塊。免疫組化常見(jiàn)問(wèn)題原因分析!

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免疫組化臨床應(yīng)用中,可以對(duì)傳染性疾病診斷。應(yīng)用抗病毒、細(xì)菌、zhen菌和寄生蟲(chóng)抗原的特異性抗體進(jìn)行免疫組化染色,可以檢測(cè)和診斷許多傳染性疾病病原微生物,如乙型肝炎病毒(HBV)、巨細(xì)胞病毒(CMV)、人乳T(mén)狀瘤病毒(HPV)、皰疹病毒(HSV)、丙型肝炎病毒(HVC)、細(xì)小病毒B19、人禽流行性感冒病毒(AIV)、嚴(yán)重急性呼吸綜合征冠狀病毒(SARS)等等,由于免疫組化在傳染性疾病診斷中具有及時(shí)性、低風(fēng)險(xiǎn)性、高敏感性、特異性、有效性等特點(diǎn),可以用于(1)用于人類新病原微生物的識(shí)別;(2)提供快速的形態(tài)學(xué)診斷,使嚴(yán)重傳染性疾病得以早期醫(yī)療;(3)在無(wú)法取得新鮮組織或尚無(wú)培養(yǎng)方法的情況下,提供診斷并對(duì)發(fā)病機(jī)制進(jìn)行研究和認(rèn)識(shí)。英瀚斯生物專業(yè)做實(shí)驗(yàn)外包服務(wù),一站式醫(yī)學(xué)科研平臺(tái)。免疫組化檢測(cè)經(jīng)驗(yàn)總結(jié)!吉林動(dòng)物組織免疫組化外包

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病理醫(yī)師日常工作中經(jīng)常說(shuō)的一句話應(yīng)該就是“做個(gè)免疫組化吧”;不管是臨床醫(yī)師,還是患者,他們問(wèn)的多的問(wèn)題則是“為什么要做免疫組化?”病理醫(yī)師通過(guò)“特殊染色”來(lái)進(jìn)行細(xì)胞的識(shí)別。這一做法的依據(jù)是特定細(xì)胞和組織中的成分不同、則化學(xué)性質(zhì)不同,通過(guò)染色的方法則可以呈現(xiàn)不同顏色。不過(guò),由于組織固定或儲(chǔ)存等,會(huì)造成相應(yīng)物質(zhì)的活性降低甚至消失,因而限制了特殊染色方法的應(yīng)用。隨著免疫學(xué)研究的進(jìn)展,根據(jù)抗原與相應(yīng)抗體間特異性結(jié)合的性質(zhì),則有了現(xiàn)在免疫組化的方法:不同細(xì)胞、不同組織中抗原有一定差異,抗體與被測(cè)組織中的特定抗原結(jié)合,進(jìn)而通過(guò)一定顯色方法將結(jié)合的抗體顯示出來(lái)。如有相應(yīng)顯色,則證實(shí)可能有被測(cè)抗原;無(wú)顯色則可能無(wú)被測(cè)抗原。當(dāng)然,這一方法中需注意相應(yīng)的“例外”,如抗體的非特異性結(jié)合、非特異性顯色,則容易造成“假陽(yáng)性”;或者雖有相關(guān)抗原、但所用抗體與該抗原并未結(jié)合等,則容易造成“假陰性”。隨著免疫組化的應(yīng)用經(jīng)驗(yàn)的增加,這些問(wèn)題在常規(guī)應(yīng)用中盡量得以避免,前者如各種顯色方法的優(yōu)化;后者如抗原修復(fù)方法的優(yōu)化、新型抗體開(kāi)發(fā)及選擇。福建什么是免疫組化

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