PEI 轉(zhuǎn)染試劑公司

共轉(zhuǎn)染是將一種以上類型的核酸引入真核細胞的過程。組合的一些例子包括多個質(zhì)粒DNA ,siRNA和質(zhì)粒DNA ，以及多個miRNAs進入同一個細胞。通常，多質(zhì)粒DNA共轉(zhuǎn)染的目的是將一種以上的外源基因?qū)胨拗骷毎Ｆ鋺?yīng)用之一是生產(chǎn)由幾種質(zhì)粒DNA成分組成的合成病毒或雜交載體。一個例子是在HEK293細胞系中，用轉(zhuǎn)移、包膜和包裝載體等幾種質(zhì)粒載體生成慢病毒。此外，多個質(zhì)粒DNA的共轉(zhuǎn)染也可以應(yīng)用于蛋白質(zhì)-蛋白質(zhì)相互作用(PPI)研究，以研究一種蛋白質(zhì)與另一種蛋白質(zhì)之間的關(guān)系。陽離子脂質(zhì)體合成中常用的分子是中性脂質(zhì)二油基磷脂酰乙醇胺(DOPE)。PEI 轉(zhuǎn)染試劑公司

在轉(zhuǎn)染實驗中使用對照對于確定所使用的轉(zhuǎn)染試劑和核酸的效果和效率至關(guān)重要。通常，質(zhì)粒轉(zhuǎn)染和寡核苷酸轉(zhuǎn)染實驗都需要陽性對照、陰性對照、未轉(zhuǎn)染對照和模擬轉(zhuǎn)染對照。陽性對照是先前已被證明對轉(zhuǎn)染實驗產(chǎn)生已知影響的DNA或RNA，例如影響特定下游遺傳靶點的表達。在轉(zhuǎn)染工作的初始階段，需要一個陽性對照來建立一個優(yōu)化的轉(zhuǎn)染方案，之后，陽性對照可以作為參考，與實驗組進行比較。另一方面，陰性對照用于確認宿主細胞中預(yù)期的基因表達變化是否歸因于轉(zhuǎn)染而不是其他原因。在質(zhì)粒DNA轉(zhuǎn)染中，陰性對照可以是缺乏DNA和轉(zhuǎn)染載體的反應(yīng)，或者兩者都沒有，只有宿主細胞。在小RNA轉(zhuǎn)染中，陰性對照包含一個非同源序列，該序列通常是一個與靶序列具有相同核苷酸長度和組成但與任何已知哺乳動物基因不同源的打亂序列。未轉(zhuǎn)染的對照包括不含轉(zhuǎn)染試劑和核酸的細胞培養(yǎng)，作為宿主細胞基本信息的對照，包括活力、表型，更重要的是，不受轉(zhuǎn)染影響的靶基因的基線表達水平。模擬轉(zhuǎn)染是指不含遺傳靶標或核酸的轉(zhuǎn)染，可以評估轉(zhuǎn)染試劑(如背景自熒光噪聲)產(chǎn)生的影響。在質(zhì)粒轉(zhuǎn)染實驗中，推薦使用空質(zhì)粒對照作為模擬轉(zhuǎn)染對照。廣西脾轉(zhuǎn)染試劑研究人員集中研究了將合成t細胞免疫原作為DNA疫苗使用的方法。

**近的研究已經(jīng)確定了陽離子脂質(zhì)體（CLs）的某些特征，這些特征增強了它們在體內(nèi)轉(zhuǎn)運核酸的能力。這些特征包括陽離子頭基團及其鄰近的脂肪鏈在主鏈上呈1,2關(guān)系，醚鍵用于橋接脂肪鏈到主鏈，成對的油基鏈作為疏水系鏈。無論如何，這些特征雖然不能決定細胞培養(yǎng)中更好的轉(zhuǎn)染能力，但可以在體內(nèi)實現(xiàn)更好的核酸遞送。因此，必須謹慎對待體外和細胞培養(yǎng)的結(jié)果，不能必然地用來推斷核酸載體在體內(nèi)的潛力。當(dāng)這些囊泡在體內(nèi)引入時，其他因素(如顆粒直徑)變得更加重要。使用脂質(zhì)體時遇到的毒性通常與制劑中陽離子脂質(zhì)與核酸之間的電荷比、所使用的制劑類型以及所給脂質(zhì)體的劑量密切相關(guān)。較高的電荷比通常對多種細胞類型的毒性更大，包括*細胞系。另外，不同的試劑對細胞的毒性程度不同，毒性是細胞特異性的。目前市面上有超過30種不同的商用CL制劑品種可供選擇。由于毒性，脂質(zhì)體的體內(nèi)遞送必須盡可能靠近目標部位，以盡量減少副作用。

在轉(zhuǎn)染中，DNA通常通過病毒或非病毒載體(如質(zhì)粒)轉(zhuǎn)運到宿主細胞中。質(zhì)粒的基本結(jié)構(gòu)包括啟動子、復(fù)制起點、多個克隆位點、目標基因和選擇標記。質(zhì)粒復(fù)制需要復(fù)制的起源，而多個克隆位點包含獨特的內(nèi)切酶切割位點，用于插入外源基因。適當(dāng)?shù)恼婧藛幼?如CMV或EF-1a)的存在允許外源基因在宿主細胞中表達。質(zhì)粒DNA可以以線性和超螺旋DNA的形式轉(zhuǎn)染。與線性DNA相比，使用超螺旋質(zhì)粒DNA轉(zhuǎn)染通常會產(chǎn)生更高的效率，線性DNA更容易被外切酶降解。然而，線性化的DNA更具重組性，因此可以更容易地整合到宿主基因組中以實現(xiàn)穩(wěn)定的轉(zhuǎn)染。是由非離子核酸與陽離子脂質(zhì)體（CLs）表面結(jié)合，形成多層脂質(zhì)-核酸復(fù)合物而形成的。

納米顆粒在疫苗遞送中往往表現(xiàn)出***的佐劑作用。陽離子聚合物，包括PEI、聚賴氨酸、陽離子葡聚糖和陽離子明膠，已經(jīng)有報道顯示出對Th1反應(yīng)的強烈刺激，其特征是誘導(dǎo)CD4(+)T細胞增殖和th1相關(guān)細胞因子的分泌。此外，陽離子聚合物強烈抑制LPS誘導(dǎo)的巨噬細胞分泌TNF-α。陽離子聚合物的刺激能力與其陽離子化程度有關(guān)，陽離子聚合物與陰離子聚合物的中和可以完全消除刺激作用。聚合物的分子量也會影響其刺激能力，分子越大意味著刺激能力越大。評估轉(zhuǎn)染效率至關(guān)重要，特別是在需要高轉(zhuǎn)染效率以保證特定下游靶標轉(zhuǎn)錄后調(diào)控的功能研究中。青海轉(zhuǎn)染試劑試用

基因是陽離子聚合物作為轉(zhuǎn)染劑的主要應(yīng)用。PEI 轉(zhuǎn)染試劑公司

脂質(zhì)復(fù)合物(CLNACs)通過網(wǎng)格蛋白參與的內(nèi)吞作用進入細胞，并被困在核內(nèi)小體中，從這些囊泡結(jié)構(gòu)中釋放出來，進入核周區(qū)域，***進入細胞核。內(nèi)吞作用在一定程度上取決于脂質(zhì)體載體的物理化學(xué)性質(zhì)。Friend和同事描述了可能由脂質(zhì)體與核膜融合而形成的囊泡和網(wǎng)狀核內(nèi)膜。**近有研究表明，很大一部分從核內(nèi)體釋放到細胞質(zhì)質(zhì)的質(zhì)粒由于與細胞質(zhì)中的大離子凝聚劑結(jié)合而失去活性。這可能解釋了脂質(zhì)轉(zhuǎn)染所觀察到的低且可變的轉(zhuǎn)染率。雖然這些脂質(zhì)載體從細胞外部到細胞核的路徑尚未完全確定，但核酸能夠產(chǎn)生其效果本身就是一項驚人的壯舉。至少對于質(zhì)粒而言，較小的結(jié)構(gòu)體比較大的質(zhì)粒具有更高的轉(zhuǎn)染率。核酸外排，雖然不是常見的報道，但也被證明會發(fā)生。PEI 轉(zhuǎn)染試劑公司