對(duì)細(xì)胞活力的影響：一些研究表明，在陽(yáng)離子脂質(zhì)體LipofectamineTM2000介導(dǎo)下雞TRPV6基因RNA干擾（RNAi）質(zhì)粒轉(zhuǎn)染入成骨細(xì)胞的實(shí)驗(yàn)中，當(dāng)轉(zhuǎn)染前細(xì)胞融合達(dá)到90％以上，質(zhì)粒DNA與脂質(zhì)體比例為1:2.5時(shí)轉(zhuǎn)染效率比較高，并且在轉(zhuǎn)染后48h轉(zhuǎn)染效果比較好，對(duì)細(xì)胞的毒性作用較小3。在人肝瘤兩種細(xì)胞模型中，通過(guò)比較LipofectamineRnaimax和Genmute轉(zhuǎn)染劑發(fā)現(xiàn)，用基因***的細(xì)胞呈現(xiàn)熒光陰性對(duì)照siRNA的更高攝取，并且觀察到與基因轉(zhuǎn)染的細(xì)胞相對(duì)于脂質(zhì)積rnaimax的細(xì)胞具有較高的活力6。有研究使用兩種常見(jiàn)的RNA干擾（RNAi）轉(zhuǎn)染試劑DharmaFE...

考慮細(xì)胞毒性低細(xì)胞毒性的轉(zhuǎn)染試劑對(duì)于保持細(xì)胞的活性和正常生理功能至關(guān)重要。評(píng)估細(xì)胞活力：可以通過(guò)檢測(cè)細(xì)胞的存活率、增殖能力等指標(biāo)來(lái)評(píng)估轉(zhuǎn)染試劑的細(xì)胞毒性。在研究不同轉(zhuǎn)染試劑對(duì)C2C12細(xì)胞的轉(zhuǎn)染效率時(shí)，通過(guò)優(yōu)化DNA:轉(zhuǎn)染劑比例和細(xì)胞密度，使所有試劑在達(dá)到較高轉(zhuǎn)染效率的同時(shí)，對(duì)細(xì)胞生長(zhǎng)和活力的影響有限6。在比較不同轉(zhuǎn)染試劑遞送siRNA的攝取、敲低效率和毒性情況的研究中，新開(kāi)發(fā)的CALNPRNAi轉(zhuǎn)染試劑轉(zhuǎn)染效率***高于傳統(tǒng)轉(zhuǎn)染試劑，同時(shí)毒性比較低7。選擇溫和的試劑：一些轉(zhuǎn)染試劑可能對(duì)細(xì)胞的毒性較小，例如基于脂質(zhì)的轉(zhuǎn)染試劑通常比基于病毒的轉(zhuǎn)染試劑更溫和。在顱內(nèi)遞送合成mRNA的研究中，使用常...

考慮多因子轉(zhuǎn)染能力如果實(shí)驗(yàn)需要同時(shí)轉(zhuǎn)染多個(gè)RNA分子或進(jìn)行共轉(zhuǎn)染實(shí)驗(yàn)，那么選擇具有多因子轉(zhuǎn)染能力的試劑是重要的。共轉(zhuǎn)染效果：一些轉(zhuǎn)染試劑可以有效地實(shí)現(xiàn)多個(gè)RNA分子的共轉(zhuǎn)染，而另一些試劑可能在共轉(zhuǎn)染方面效果不佳。在脂質(zhì)體方法用于modRNA轉(zhuǎn)染各種類型細(xì)胞的初步研究中，MessageMax能將modGFP高效轉(zhuǎn)染入多種細(xì)胞中，并實(shí)現(xiàn)modGFP和modmCherry在MEF細(xì)胞中的共轉(zhuǎn)及核內(nèi)因子nGFP和mTBX5在MEF細(xì)胞核中的定位5。選擇適合多因子轉(zhuǎn)染的試劑：根據(jù)實(shí)驗(yàn)需求，選擇能夠滿足多因子轉(zhuǎn)染要求的轉(zhuǎn)染試劑。例如，如果實(shí)驗(yàn)需要同時(shí)轉(zhuǎn)染多個(gè)基因或進(jìn)行基因編輯實(shí)驗(yàn)，那么選擇具有多因子轉(zhuǎn)染能...

準(zhǔn)確控制脂質(zhì)體與核酸的比例是關(guān)鍵。通過(guò)實(shí)驗(yàn)確定比較好的脂質(zhì)體 - 核酸復(fù)合物比例，一般可以進(jìn)行梯度實(shí)驗(yàn)，從較低比例開(kāi)始逐步增加，觀察轉(zhuǎn)染效率的變化。例如，不同類型的細(xì)胞對(duì)脂質(zhì)體和 RNA 或 DNA 的比例要求不同，像在轉(zhuǎn)染 HEK293 細(xì)胞時(shí)，可能 1:3（脂質(zhì)體：核酸）的比例比較合適，而對(duì)于較難轉(zhuǎn)染的原代細(xì)胞，可能需要適當(dāng)增加脂質(zhì)體的用量。 不同配方的脂質(zhì)體在轉(zhuǎn)染效率上有差異。根據(jù)細(xì)胞類型和實(shí)驗(yàn)?zāi)康倪x擇合適的脂質(zhì)體試劑。例如，一些脂質(zhì)體含有特殊的功能成分，如靶向基團(tuán)可以增強(qiáng)與特定細(xì)胞的結(jié)合，或者具有促進(jìn)內(nèi)吞體逃逸的成分，從而提高轉(zhuǎn)染效率。新型的脂質(zhì)體制劑不斷涌現(xiàn)，如含有可電離陽(yáng)...

對(duì)于容易轉(zhuǎn)染的貼壁細(xì)胞如人胚腎細(xì)胞（HEK293）和人宮頸*細(xì)胞（HeLa），脂質(zhì)體轉(zhuǎn)染效率相對(duì)較高。這些細(xì)胞具有較強(qiáng)的內(nèi)吞能力，能夠有效地?cái)z取脂質(zhì)體-核酸復(fù)合物。例如，在標(biāo)準(zhǔn)的轉(zhuǎn)染條件下，HEK293細(xì)胞的轉(zhuǎn)染效率可以達(dá)到50%-70%。而對(duì)于一些難轉(zhuǎn)染的貼壁細(xì)胞，如原代肝細(xì)胞和某些神經(jīng)細(xì)胞，其轉(zhuǎn)染效率較低。這是因?yàn)樗鼈兊募?xì)胞膜結(jié)構(gòu)比較復(fù)雜，可能存在較厚的糖萼或者緊密的細(xì)胞間連接，阻礙了脂質(zhì)體-核酸復(fù)合物的進(jìn)入。例如，原代肝細(xì)胞的轉(zhuǎn)染效率可能只有10%-20%。 一般來(lái)說(shuō)，貼壁細(xì)胞對(duì)脂質(zhì)體的耐受性相對(duì)較好。但是，在高濃度脂質(zhì)體轉(zhuǎn)染的情況下，即使是耐受性好的細(xì)胞也會(huì)受到影響。例如，H...

納米顆粒遞送藥物并發(fā)揮功能的能力在很大程度上取決于它們被細(xì)胞攝取的機(jī)制。以蒲公英湯劑體為例，研究發(fā)現(xiàn)親溶酶體物質(zhì)能***抑制蒲公英湯劑體進(jìn)入細(xì)胞；巨胞飲抑制劑細(xì)胞松弛素D和阿米洛利能***降低蒲公英湯劑體的胞內(nèi)攝入，且呈現(xiàn)劑量依賴性，敲減Rac1和PAK1也有效地抑制其進(jìn)入細(xì)胞。這些結(jié)果提示蒲公英湯劑體通過(guò)內(nèi)吞進(jìn)入A549細(xì)胞且主要由巨胞飲介導(dǎo)26。同理，RNA轉(zhuǎn)染試劑在某些情況下也可能利用巨胞飲途徑進(jìn)入細(xì)胞。電穿孔轉(zhuǎn)染中的內(nèi)吞途徑電穿孔轉(zhuǎn)染是一種用于基因遞送的技術(shù)，在研究其機(jī)制時(shí)發(fā)現(xiàn)，用冰冷介質(zhì)處理或在電穿孔轉(zhuǎn)染前使用內(nèi)吞抑制劑處理三種不同的人類細(xì)胞系（HEK293、HCT116和HT29）...

核細(xì)胞、關(guān)節(jié)軟骨細(xì)胞、間充質(zhì)干細(xì)胞（MSCs）：選擇兩種合成轉(zhuǎn)染試劑（陽(yáng)離子脂質(zhì)商業(yè)試劑LipofectamineRNAiMAX和聚乙烯亞胺（PEI））以及兩種天然衍生轉(zhuǎn)染試劑（多糖殼聚糖（98%脫乙酰化）和透明質(zhì)酸（20%酰胺化）），用于將siRNA遞送到包括髓核細(xì)胞、關(guān)節(jié)軟骨細(xì)胞和間充質(zhì)干細(xì)胞在內(nèi)的原代間充質(zhì)細(xì)胞中。以甘油醛-3-磷酸脫氫酶（***DH）作為內(nèi)源性模型基因，在轉(zhuǎn)染后第3天和第6天評(píng)估由20nM或200nMsiRNA引起的沉默程度。除了沉默效率外，還評(píng)估了細(xì)胞毒性、DNA含量變化和細(xì)胞分化潛能等非特異性影響。在四種轉(zhuǎn)染試劑中，基于商業(yè)脂質(zhì)體的試劑在20nMsiRN...

RNA轉(zhuǎn)染試劑在不同細(xì)胞類型中的轉(zhuǎn)染機(jī)制存在多種差異。以下將詳細(xì)闡述不同RNA轉(zhuǎn)染試劑在不同細(xì)胞類型中轉(zhuǎn)染機(jī)制的差異表現(xiàn)。脂質(zhì)體轉(zhuǎn)染試劑：機(jī)制概述：脂質(zhì)體轉(zhuǎn)染試劑通常由陽(yáng)離子脂質(zhì)和中性脂質(zhì)組成，其轉(zhuǎn)染機(jī)制主要是通過(guò)與帶負(fù)電的RNA分子結(jié)合，形成脂質(zhì)體-RNA復(fù)合物。這個(gè)復(fù)合物能夠與細(xì)胞膜相互作用，通過(guò)內(nèi)吞作用或膜融合等方式進(jìn)入細(xì)胞。進(jìn)入細(xì)胞后，脂質(zhì)體-RNA復(fù)合物逐漸釋放RNA分子，使其能夠在細(xì)胞內(nèi)發(fā)揮作用。在不同細(xì)胞類型中的表現(xiàn)：在腎*細(xì)胞系786-O和ACHN中，目前雖未明確提及脂質(zhì)體轉(zhuǎn)染試劑的作用，但可以推測(cè)其可能通過(guò)類似的機(jī)制進(jìn)入細(xì)胞，影響細(xì)胞內(nèi)的基因表達(dá)和細(xì)胞生長(zhǎng)。例如，微小RNA-...

RNA電穿孔高效轉(zhuǎn)染原代淋巴細(xì)胞：使用體外轉(zhuǎn)錄的mRNA通過(guò)電穿孔可以實(shí)現(xiàn)高基因轉(zhuǎn)染效率和低轉(zhuǎn)染相關(guān)毒性。例如，在用GFP或mCD62L轉(zhuǎn)染的受激原代人和鼠T淋巴細(xì)胞中觀察到90％以上的轉(zhuǎn)基因表達(dá)和80％以上的活細(xì)胞。GFPRNA對(duì)未刺激的人PBMC或鼠脾細(xì)胞進(jìn)行電穿孔，分別產(chǎn)生95％和56％的GFP?細(xì)胞。此外，基因表達(dá)迅速且持久，對(duì)經(jīng)過(guò)RNA電穿孔的T淋巴細(xì)胞未觀察到不良影響7。五、優(yōu)化共轉(zhuǎn)染方法整合共轉(zhuǎn)染和平行共轉(zhuǎn)染：研究不同的共轉(zhuǎn)染和連續(xù)轉(zhuǎn)染方法，特別是體外轉(zhuǎn)錄信使RNA（IVTmRNA）。對(duì)于在納米載體形成之前預(yù)混合的IVTmRNAs（整合共轉(zhuǎn)染）和同時(shí)用單獨(dú)形成的納米載體轉(zhuǎn)染細(xì)胞（...

動(dòng)物視網(wǎng)膜成像技術(shù)為基礎(chǔ)研究提供了有力工具。從小鼠視網(wǎng)膜多種成像方式探討眼科光學(xué)成像技術(shù)進(jìn)展：張鵬飛、張廷瑋、宋維業(yè)闡述了近年來(lái)在小鼠和人眼視網(wǎng)膜高精度光學(xué)成像領(lǐng)域出現(xiàn)的技術(shù)突破6。幾種在人眼視網(wǎng)膜成像中廣泛應(yīng)用的光學(xué)成像技術(shù)在動(dòng)物視網(wǎng)膜中得到了成功應(yīng)用，實(shí)現(xiàn)了對(duì)動(dòng)物視網(wǎng)膜的高精度細(xì)胞級(jí)別成像，為科研工作者提供了有力工具。同時(shí)，動(dòng)物視網(wǎng)膜的研究工作也開(kāi)發(fā)了一些新型成像技術(shù)或增強(qiáng)了對(duì)人眼視網(wǎng)膜功能機(jī)理的理解。綜上所述，動(dòng)物成像技術(shù)在磁共振成像、熱成像、X射線發(fā)光成像、近紅外高光譜成像、非人靈長(zhǎng)類動(dòng)物超高場(chǎng)磁共振腦成像、新型動(dòng)物搖籃的小動(dòng)物多重成像、紅外成像以及動(dòng)物視網(wǎng)膜成像等方面都取得了***的...

三、脂質(zhì)體組成對(duì)轉(zhuǎn)染效率的影響不同脂質(zhì)組成的影響：研究發(fā)現(xiàn)脂質(zhì)體的組成對(duì)不同類型細(xì)胞的轉(zhuǎn)染效率有影響。例如，四種不同的DOTAP與DOPE重量比的脂質(zhì)體配方對(duì)不同細(xì)胞系的轉(zhuǎn)染效率不同。Huh7和AGS細(xì)胞的比較好脂質(zhì)體組成是T1P0和T3P1；COS7細(xì)胞是T3P1和T1P1；A549細(xì)胞是T1P1和T1P36。脂質(zhì)體結(jié)構(gòu)的影響：脂質(zhì)體復(fù)合物的形狀會(huì)隨著DOPE比例的增加從層狀結(jié)構(gòu)變?yōu)榈沽切谓Y(jié)構(gòu)，但在所有使用的細(xì)胞系中，特定結(jié)構(gòu)在轉(zhuǎn)染效率上沒(méi)有明確的優(yōu)勢(shì)6。四、其他因素的影響血清的影響：對(duì)于某些細(xì)胞，血清的存在會(huì)影響轉(zhuǎn)染效率。如Siha細(xì)胞在無(wú)血清培養(yǎng)基中培養(yǎng)時(shí)轉(zhuǎn)染效率更高，而在Caco-2...

靶向特定基因座提高穩(wěn)定轉(zhuǎn)染效率：在布魯氏錐蟲(chóng)中，利用RNAi的構(gòu)建體和（GFP）標(biāo)記的蛋白的表達(dá)，靶向（hyg）標(biāo)記的核糖體RNA（RRNA）基因座，可以規(guī)避位置效應(yīng)并提高靶向效率。該系統(tǒng)還利用新的誘導(dǎo)型RRNA啟動(dòng)子來(lái)驅(qū)動(dòng)T7RNA聚合酶（T7RNAP）轉(zhuǎn)錄，然后從誘導(dǎo)型T7啟動(dòng)子驅(qū)動(dòng)表達(dá)，可減輕當(dāng)前表達(dá)系統(tǒng)的一些問(wèn)題9。綜上所述，提高RNA轉(zhuǎn)染效率的策略包括選擇合適的轉(zhuǎn)染試劑、利用魚精蛋白、優(yōu)化電轉(zhuǎn)方法、采用RNA電穿孔、優(yōu)化共轉(zhuǎn)染方法以及靶向特定基因座等。這些策略可以根據(jù)不同的實(shí)驗(yàn)需求和細(xì)胞類型進(jìn)行選擇和組合，以提高RNA轉(zhuǎn)染效率，為RNA研究和應(yīng)用提供有力支持。核酸與轉(zhuǎn)染試劑的比例對(duì)轉(zhuǎn)...

其他轉(zhuǎn)染試劑：機(jī)制概述：例如CALNPRNAi轉(zhuǎn)染試劑，其轉(zhuǎn)染機(jī)制可能與傳統(tǒng)轉(zhuǎn)染試劑不同。該試劑轉(zhuǎn)染效率***高于傳統(tǒng)轉(zhuǎn)染試劑，同時(shí)毒性比較低。其具體轉(zhuǎn)染機(jī)制可能涉及對(duì)RNA的攝取、細(xì)胞利用率及細(xì)胞毒性的綜合作用。在不同細(xì)胞類型中的表現(xiàn)：目前文獻(xiàn)中未明確提及CALNPRNAi轉(zhuǎn)染試劑在特定細(xì)胞類型中的具體表現(xiàn)，但研究表明該試劑為難轉(zhuǎn)染細(xì)胞的RNA干擾帶來(lái)了新的選擇7。綜上所述，不同RNA轉(zhuǎn)染試劑在不同細(xì)胞類型中的轉(zhuǎn)染機(jī)制存在差異，這些差異主要表現(xiàn)在與RNA的結(jié)合方式、進(jìn)入細(xì)胞的途徑以及在細(xì)胞內(nèi)的釋放和作用方式等方面。了解這些差異對(duì)于選擇合適的轉(zhuǎn)染試劑進(jìn)行特定細(xì)胞類型的RNA轉(zhuǎn)染實(shí)驗(yàn)具有重要意義...

對(duì)細(xì)胞活力的影響：一些研究表明，在陽(yáng)離子脂質(zhì)體LipofectamineTM2000介導(dǎo)下雞TRPV6基因RNA干擾（RNAi）質(zhì)粒轉(zhuǎn)染入成骨細(xì)胞的實(shí)驗(yàn)中，當(dāng)轉(zhuǎn)染前細(xì)胞融合達(dá)到90％以上，質(zhì)粒DNA與脂質(zhì)體比例為1:2.5時(shí)轉(zhuǎn)染效率比較高，并且在轉(zhuǎn)染后48h轉(zhuǎn)染效果比較好，對(duì)細(xì)胞的毒性作用較小3。在人肝瘤兩種細(xì)胞模型中，通過(guò)比較LipofectamineRnaimax和Genmute轉(zhuǎn)染劑發(fā)現(xiàn)，用基因***的細(xì)胞呈現(xiàn)熒光陰性對(duì)照siRNA的更高攝取，并且觀察到與基因轉(zhuǎn)染的細(xì)胞相對(duì)于脂質(zhì)積rnaimax的細(xì)胞具有較高的活力6。有研究使用兩種常見(jiàn)的RNA干擾（RNAi）轉(zhuǎn)染試劑DharmaFE...

RNA電穿孔高效轉(zhuǎn)染原代淋巴細(xì)胞：使用體外轉(zhuǎn)錄的mRNA通過(guò)電穿孔可以實(shí)現(xiàn)高基因轉(zhuǎn)染效率和低轉(zhuǎn)染相關(guān)毒性。例如，在用GFP或mCD62L轉(zhuǎn)染的受激原代人和鼠T淋巴細(xì)胞中觀察到90％以上的轉(zhuǎn)基因表達(dá)和80％以上的活細(xì)胞。GFPRNA對(duì)未刺激的人PBMC或鼠脾細(xì)胞進(jìn)行電穿孔，分別產(chǎn)生95％和56％的GFP?細(xì)胞。此外，基因表達(dá)迅速且持久，對(duì)經(jīng)過(guò)RNA電穿孔的T淋巴細(xì)胞未觀察到不良影響7。五、優(yōu)化共轉(zhuǎn)染方法整合共轉(zhuǎn)染和平行共轉(zhuǎn)染：研究不同的共轉(zhuǎn)染和連續(xù)轉(zhuǎn)染方法，特別是體外轉(zhuǎn)錄信使RNA（IVTmRNA）。對(duì)于在納米載體形成之前預(yù)混合的IVTmRNAs（整合共轉(zhuǎn)染）和同時(shí)用單獨(dú)形成的納米載體轉(zhuǎn)染細(xì)胞（...

納米顆粒遞送藥物并發(fā)揮功能的能力在很大程度上取決于它們被細(xì)胞攝取的機(jī)制。以蒲公英湯劑體為例，研究發(fā)現(xiàn)親溶酶體物質(zhì)能***抑制蒲公英湯劑體進(jìn)入細(xì)胞；巨胞飲抑制劑細(xì)胞松弛素D和阿米洛利能***降低蒲公英湯劑體的胞內(nèi)攝入，且呈現(xiàn)劑量依賴性，敲減Rac1和PAK1也有效地抑制其進(jìn)入細(xì)胞。這些結(jié)果提示蒲公英湯劑體通過(guò)內(nèi)吞進(jìn)入A549細(xì)胞且主要由巨胞飲介導(dǎo)26。同理，RNA轉(zhuǎn)染試劑在某些情況下也可能利用巨胞飲途徑進(jìn)入細(xì)胞。電穿孔轉(zhuǎn)染中的內(nèi)吞途徑電穿孔轉(zhuǎn)染是一種用于基因遞送的技術(shù)，在研究其機(jī)制時(shí)發(fā)現(xiàn)，用冰冷介質(zhì)處理或在電穿孔轉(zhuǎn)染前使用內(nèi)吞抑制劑處理三種不同的人類細(xì)胞系（HEK293、HCT116和HT29）...

在人類多能干細(xì)胞衍生的心肌細(xì)胞（HPSC-CMs）中的應(yīng)用低轉(zhuǎn)染效率是實(shí)現(xiàn)HPSC-CMs在疾病建模和心臟修復(fù)研究中廣泛應(yīng)用的障礙。通過(guò)優(yōu)化四個(gè)基本參數(shù)，即血清補(bǔ)充劑、復(fù)制和轉(zhuǎn)染之間的時(shí)間、試劑與DNA比以及細(xì)胞密度，使用Promega的Viafect?轉(zhuǎn)染試劑能夠?qū)PSC-CMs轉(zhuǎn)染至約95%的效率28。盡管活力有所降低，但轉(zhuǎn)染后的HPSC-CMs仍保持了高純度和結(jié)構(gòu)完整性，確保了至少14天的轉(zhuǎn)染基因持續(xù)表達(dá)，為心臟相關(guān)疾病的研究開(kāi)辟了新機(jī)遇。在C2C12細(xì)胞中的應(yīng)用C2C12細(xì)胞在肌肉領(lǐng)域***使用，但它們和原代成肌細(xì)胞一樣難以轉(zhuǎn)染，影響了下游實(shí)驗(yàn)。雖然自2015年以來(lái)超過(guò)95%的使用C...

轉(zhuǎn)染時(shí)間：轉(zhuǎn)染時(shí)間的長(zhǎng)短也會(huì)影響轉(zhuǎn)染效率。過(guò)長(zhǎng)或過(guò)短的轉(zhuǎn)染時(shí)間都可能導(dǎo)致轉(zhuǎn)染效率降低。在陽(yáng)離子脂質(zhì)體Lipofectamine2000對(duì)PC12細(xì)胞的轉(zhuǎn)染實(shí)驗(yàn)中，轉(zhuǎn)染時(shí)間為6h時(shí)轉(zhuǎn)染效率較高3。在優(yōu)化宮頸*細(xì)胞系轉(zhuǎn)染效率的實(shí)驗(yàn)中，Hela細(xì)胞系和Siha細(xì)胞系的比較好轉(zhuǎn)染時(shí)間為24小時(shí)1。細(xì)胞接種密度：細(xì)胞接種密度也會(huì)影響轉(zhuǎn)染效率。過(guò)高或過(guò)低的細(xì)胞接種密度都可能導(dǎo)致轉(zhuǎn)染效率降低。在脂質(zhì)體介導(dǎo)法轉(zhuǎn)染腫瘤細(xì)胞效率的優(yōu)化實(shí)驗(yàn)中，2×105接種密度時(shí)轉(zhuǎn)染效率比較高9。在優(yōu)化宮頸*細(xì)胞系轉(zhuǎn)染效率的實(shí)驗(yàn)中，Hela細(xì)胞系和Siha細(xì)胞系的比較好接種密度分別為1.5×104（每孔24孔板）1。血清的有無(wú)：血...

陽(yáng)離子聚合物作為轉(zhuǎn)染試劑結(jié)合機(jī)制：以陽(yáng)離子聚合物EZTransCellReagent為例，在優(yōu)化RNA干擾（RNAi）條件的研究中發(fā)現(xiàn)，陽(yáng)離子聚合物通過(guò)與RNA分子結(jié)合來(lái)實(shí)現(xiàn)轉(zhuǎn)染14。例如，設(shè)計(jì)針對(duì)GFP的shRNA，使用EZ轉(zhuǎn)染試劑將其轉(zhuǎn)染到細(xì)胞中，shRNA***降低了GFP的表達(dá)。預(yù)稀釋的轉(zhuǎn)染試劑在室溫下以及小核酸的存在可增加轉(zhuǎn)染效率，且在24小時(shí)時(shí)達(dá)到峰值。與環(huán)狀核酸相比，線性核酸與陽(yáng)離子聚合物結(jié)合時(shí)顯示出更高的轉(zhuǎn)染效率和更高的基因組整合率。作用特點(diǎn)：陽(yáng)離子聚合物介導(dǎo)的RNAi條件優(yōu)化后，為未來(lái)的RNAi研究提供了有用的數(shù)據(jù)。影響物理轉(zhuǎn)染或機(jī)械轉(zhuǎn)染效率的因素在很大程度上取決于這些方法的...

在核酸遞送中的應(yīng)用核酸***可以通過(guò)基因增強(qiáng)、基因抑制和基因組編輯實(shí)現(xiàn)持久甚至***的效果。然而，裸核酸分子難以進(jìn)入細(xì)胞，陽(yáng)離子聚合物作為非病毒核酸遞送系統(tǒng)，其分子上帶有正電荷基團(tuán)，可濃縮核酸分子形成納米顆粒，幫助核酸跨越屏障在細(xì)胞中表達(dá)蛋白質(zhì)或抑制目標(biāo)基因表達(dá)。陽(yáng)離子聚合物易于合成、修飾和結(jié)構(gòu)控制，是一類有前途的核酸遞送系統(tǒng)7。在顱內(nèi)遞送合成mRNA中的應(yīng)用在本研究中，使用常用的轉(zhuǎn)染試劑建立了顱內(nèi)遞送合成mRNA的小鼠模型。將合成的熒光素酶mRNAs用兩種不同的轉(zhuǎn)染試劑包裹后定點(diǎn)微注射到大腦中，通過(guò)小動(dòng)物成像系統(tǒng)監(jiān)測(cè)遞送的mRNA的表達(dá)狀態(tài)，并通過(guò)行為和血液生化測(cè)量評(píng)估可能的試劑誘導(dǎo)的生物毒...

原代細(xì)胞和干細(xì)胞的轉(zhuǎn)染效率通常較低。原代細(xì)胞剛剛從組織中分離出來(lái)，還保留著體內(nèi)復(fù)雜的生理特性，其細(xì)胞膜上的受體和內(nèi)吞機(jī)制等可能不適應(yīng)脂質(zhì)體轉(zhuǎn)染。例如，原代間充質(zhì)干細(xì)胞的轉(zhuǎn)染效率可能低于10%。干細(xì)胞由于其特殊的自我更新和分化潛能，其細(xì)胞內(nèi)部的信號(hào)通路和膜運(yùn)輸機(jī)制對(duì)脂質(zhì)體轉(zhuǎn)染比較敏感，轉(zhuǎn)染效率也不高。而且在轉(zhuǎn)染過(guò)程中，還需要考慮不影響干細(xì)胞的干性，這也增加了轉(zhuǎn)染的難度。 原代細(xì)胞和干細(xì)胞對(duì)脂質(zhì)體的毒性反應(yīng)比較敏感。脂質(zhì)體可能會(huì)干擾它們的正常生理功能，如影響干細(xì)胞的自我更新和分化能力。對(duì)于原代細(xì)胞，可能會(huì)改變其原有的表型或者***細(xì)胞的應(yīng)激反應(yīng)，導(dǎo)致細(xì)胞提前衰老或者死亡。 基因注射包括通...

對(duì)于容易轉(zhuǎn)染的貼壁細(xì)胞如人胚腎細(xì)胞（HEK293）和人宮頸*細(xì)胞（HeLa），脂質(zhì)體轉(zhuǎn)染效率相對(duì)較高。這些細(xì)胞具有較強(qiáng)的內(nèi)吞能力，能夠有效地?cái)z取脂質(zhì)體-核酸復(fù)合物。例如，在標(biāo)準(zhǔn)的轉(zhuǎn)染條件下，HEK293細(xì)胞的轉(zhuǎn)染效率可以達(dá)到50%-70%。而對(duì)于一些難轉(zhuǎn)染的貼壁細(xì)胞，如原代肝細(xì)胞和某些神經(jīng)細(xì)胞，其轉(zhuǎn)染效率較低。這是因?yàn)樗鼈兊募?xì)胞膜結(jié)構(gòu)比較復(fù)雜，可能存在較厚的糖萼或者緊密的細(xì)胞間連接，阻礙了脂質(zhì)體-核酸復(fù)合物的進(jìn)入。例如，原代肝細(xì)胞的轉(zhuǎn)染效率可能只有10%-20%。 一般來(lái)說(shuō)，貼壁細(xì)胞對(duì)脂質(zhì)體的耐受性相對(duì)較好。但是，在高濃度脂質(zhì)體轉(zhuǎn)染的情況下，即使是耐受性好的細(xì)胞也會(huì)受到影響。例如，H...

其他轉(zhuǎn)染試劑：機(jī)制概述：例如CALNPRNAi轉(zhuǎn)染試劑，其轉(zhuǎn)染機(jī)制可能與傳統(tǒng)轉(zhuǎn)染試劑不同。該試劑轉(zhuǎn)染效率***高于傳統(tǒng)轉(zhuǎn)染試劑，同時(shí)毒性比較低。其具體轉(zhuǎn)染機(jī)制可能涉及對(duì)RNA的攝取、細(xì)胞利用率及細(xì)胞毒性的綜合作用。在不同細(xì)胞類型中的表現(xiàn)：目前文獻(xiàn)中未明確提及CALNPRNAi轉(zhuǎn)染試劑在特定細(xì)胞類型中的具體表現(xiàn)，但研究表明該試劑為難轉(zhuǎn)染細(xì)胞的RNA干擾帶來(lái)了新的選擇7。綜上所述，不同RNA轉(zhuǎn)染試劑在不同細(xì)胞類型中的轉(zhuǎn)染機(jī)制存在差異，這些差異主要表現(xiàn)在與RNA的結(jié)合方式、進(jìn)入細(xì)胞的途徑以及在細(xì)胞內(nèi)的釋放和作用方式等方面。了解這些差異對(duì)于選擇合適的轉(zhuǎn)染試劑進(jìn)行特定細(xì)胞類型的RNA轉(zhuǎn)染實(shí)驗(yàn)具有重要意義...

轉(zhuǎn)染時(shí)間對(duì)奶牛子宮內(nèi)膜原代上皮細(xì)胞轉(zhuǎn)染的影響：在奶牛子宮內(nèi)膜原代上皮細(xì)胞中，應(yīng)用帶有FAM標(biāo)記的miRNA-185mimics為報(bào)告基因，檢測(cè)兩種不同轉(zhuǎn)染試劑（LipofectamineRNAiMAX與Lipofectamine2000）在細(xì)胞接種不同時(shí)間后的轉(zhuǎn)染效率33。結(jié)果顯示，無(wú)論使用哪種轉(zhuǎn)染試劑，12h的轉(zhuǎn)染效率均極***高于18、24h，LipofectamineRNAiMAX各時(shí)間點(diǎn)的轉(zhuǎn)染效率均極***高于Lipofectamine2000。并且，使用LipofectamineRNAiMAX作為轉(zhuǎn)染試劑時(shí)，12h的熒光強(qiáng)度也比較高。這說(shuō)明在奶牛子宮內(nèi)膜原代上皮細(xì)胞中，選擇合適的轉(zhuǎn)染...

對(duì)細(xì)胞周期的影響：在微小RNA-1180轉(zhuǎn)染腎*細(xì)胞的實(shí)驗(yàn)中，F(xiàn)CM結(jié)果顯示，轉(zhuǎn)染miR-1180后，位于G0/G1期的細(xì)胞比例明顯增大，而位于S期和G2/M期的細(xì)胞比例明顯下降，表明細(xì)胞周期被阻滯在G0/G1期1。對(duì)轉(zhuǎn)染效率的影響：在脂質(zhì)體介導(dǎo)RNA干擾質(zhì)粒轉(zhuǎn)染雞成骨細(xì)胞條件的優(yōu)化實(shí)驗(yàn)中，對(duì)轉(zhuǎn)染前細(xì)胞融合度、質(zhì)粒質(zhì)量與脂質(zhì)體體積比及轉(zhuǎn)染時(shí)間進(jìn)行優(yōu)化，在熒光倒置顯微鏡下觀察并計(jì)算轉(zhuǎn)染效率。結(jié)果表明，在轉(zhuǎn)染前細(xì)胞融合達(dá)到90％以上，質(zhì)粒DNA與脂質(zhì)體比例為1:2.5時(shí)轉(zhuǎn)染效率比較高，并且在轉(zhuǎn)染后48h轉(zhuǎn)染效果比較好3。在篩選更優(yōu)的脂質(zhì)體轉(zhuǎn)染試劑的實(shí)驗(yàn)中，分別用RNAiMax及MessageM...

三、脂質(zhì)體組成對(duì)轉(zhuǎn)染效率的影響不同脂質(zhì)組成的影響：研究發(fā)現(xiàn)脂質(zhì)體的組成對(duì)不同類型細(xì)胞的轉(zhuǎn)染效率有影響。例如，四種不同的DOTAP與DOPE重量比的脂質(zhì)體配方對(duì)不同細(xì)胞系的轉(zhuǎn)染效率不同。Huh7和AGS細(xì)胞的比較好脂質(zhì)體組成是T1P0和T3P1；COS7細(xì)胞是T3P1和T1P1；A549細(xì)胞是T1P1和T1P36。脂質(zhì)體結(jié)構(gòu)的影響：脂質(zhì)體復(fù)合物的形狀會(huì)隨著DOPE比例的增加從層狀結(jié)構(gòu)變?yōu)榈沽切谓Y(jié)構(gòu)，但在所有使用的細(xì)胞系中，特定結(jié)構(gòu)在轉(zhuǎn)染效率上沒(méi)有明確的優(yōu)勢(shì)6。四、其他因素的影響血清的影響：對(duì)于某些細(xì)胞，血清的存在會(huì)影響轉(zhuǎn)染效率。如Siha細(xì)胞在無(wú)血清培養(yǎng)基中培養(yǎng)時(shí)轉(zhuǎn)染效率更高，而在Caco-2...

三、脂質(zhì)體組成對(duì)轉(zhuǎn)染效率的影響不同脂質(zhì)組成的影響：研究發(fā)現(xiàn)脂質(zhì)體的組成對(duì)不同類型細(xì)胞的轉(zhuǎn)染效率有影響。例如，四種不同的DOTAP與DOPE重量比的脂質(zhì)體配方對(duì)不同細(xì)胞系的轉(zhuǎn)染效率不同。Huh7和AGS細(xì)胞的比較好脂質(zhì)體組成是T1P0和T3P1；COS7細(xì)胞是T3P1和T1P1；A549細(xì)胞是T1P1和T1P36。脂質(zhì)體結(jié)構(gòu)的影響：脂質(zhì)體復(fù)合物的形狀會(huì)隨著DOPE比例的增加從層狀結(jié)構(gòu)變?yōu)榈沽切谓Y(jié)構(gòu)，但在所有使用的細(xì)胞系中，特定結(jié)構(gòu)在轉(zhuǎn)染效率上沒(méi)有明確的優(yōu)勢(shì)6。四、其他因素的影響血清的影響：對(duì)于某些細(xì)胞，血清的存在會(huì)影響轉(zhuǎn)染效率。如Siha細(xì)胞在無(wú)血清培養(yǎng)基中培養(yǎng)時(shí)轉(zhuǎn)染效率更高，而在Caco-2...

對(duì)于容易轉(zhuǎn)染的貼壁細(xì)胞如人胚腎細(xì)胞（HEK293）和人宮頸*細(xì)胞（HeLa），脂質(zhì)體轉(zhuǎn)染效率相對(duì)較高。這些細(xì)胞具有較強(qiáng)的內(nèi)吞能力，能夠有效地?cái)z取脂質(zhì)體-核酸復(fù)合物。例如，在標(biāo)準(zhǔn)的轉(zhuǎn)染條件下，HEK293細(xì)胞的轉(zhuǎn)染效率可以達(dá)到50%-70%。而對(duì)于一些難轉(zhuǎn)染的貼壁細(xì)胞，如原代肝細(xì)胞和某些神經(jīng)細(xì)胞，其轉(zhuǎn)染效率較低。這是因?yàn)樗鼈兊募?xì)胞膜結(jié)構(gòu)比較復(fù)雜，可能存在較厚的糖萼或者緊密的細(xì)胞間連接，阻礙了脂質(zhì)體-核酸復(fù)合物的進(jìn)入。例如，原代肝細(xì)胞的轉(zhuǎn)染效率可能只有10%-20%。 一般來(lái)說(shuō)，貼壁細(xì)胞對(duì)脂質(zhì)體的耐受性相對(duì)較好。但是，在高濃度脂質(zhì)體轉(zhuǎn)染的情況下，即使是耐受性好的細(xì)胞也會(huì)受到影響。例如，H...

RNA電穿孔高效轉(zhuǎn)染原代淋巴細(xì)胞：使用體外轉(zhuǎn)錄的mRNA通過(guò)電穿孔可以實(shí)現(xiàn)高基因轉(zhuǎn)染效率和低轉(zhuǎn)染相關(guān)毒性。例如，在用GFP或mCD62L轉(zhuǎn)染的受激原代人和鼠T淋巴細(xì)胞中觀察到90％以上的轉(zhuǎn)基因表達(dá)和80％以上的活細(xì)胞。GFPRNA對(duì)未刺激的人PBMC或鼠脾細(xì)胞進(jìn)行電穿孔，分別產(chǎn)生95％和56％的GFP?細(xì)胞。此外，基因表達(dá)迅速且持久，對(duì)經(jīng)過(guò)RNA電穿孔的T淋巴細(xì)胞未觀察到不良影響7。五、優(yōu)化共轉(zhuǎn)染方法整合共轉(zhuǎn)染和平行共轉(zhuǎn)染：研究不同的共轉(zhuǎn)染和連續(xù)轉(zhuǎn)染方法，特別是體外轉(zhuǎn)錄信使RNA（IVTmRNA）。對(duì)于在納米載體形成之前預(yù)混合的IVTmRNAs（整合共轉(zhuǎn)染）和同時(shí)用單獨(dú)形成的納米載體轉(zhuǎn)染細(xì)胞（...

選擇合適的轉(zhuǎn)染試劑GenMute試劑在人肝*細(xì)胞模型中的應(yīng)用：在人肝*細(xì)胞HepG2和Huh7.5中，研究對(duì)比了脂質(zhì)體類的Lipofectamine?RNAiMAX和HepG2特異性的聚合物類GenMute?兩種轉(zhuǎn)染試劑30。通過(guò)細(xì)胞成像分析發(fā)現(xiàn)，GenMute處理的細(xì)胞對(duì)熒光標(biāo)記的陰性對(duì)照siRNA的攝取高于LipofectamineRNAiMAX轉(zhuǎn)染的細(xì)胞。并且，MTT實(shí)驗(yàn)表明，GenMute轉(zhuǎn)染的細(xì)胞比LipofectamineRNAiMAX處理的細(xì)胞具有更高的存活率。這提示在人肝*細(xì)胞模型中，GenMute試劑可能是更適合的轉(zhuǎn)染試劑，在提高轉(zhuǎn)染效率的同時(shí)降低了細(xì)胞死亡。siRNA共軛殼...