準(zhǔn)確控制脂質(zhì)體與核酸的比例是關(guān)鍵。通過(guò)實(shí)驗(yàn)確定比較好的脂質(zhì)體 - 核酸復(fù)合物比例,一般可以進(jìn)行梯度實(shí)驗(yàn),從較低比例開(kāi)始逐步增加,觀察轉(zhuǎn)染效率的變化。例如,不同類型的細(xì)胞對(duì)脂質(zhì)體和 RNA 或 DNA 的比例要求不同,像在轉(zhuǎn)染 HEK293 細(xì)胞時(shí),可能 1:3(脂質(zhì)體:核酸)的比例比較合適,而對(duì)于較難轉(zhuǎn)染的原代細(xì)胞,可能需要適當(dāng)增加脂質(zhì)體的用量。
不同配方的脂質(zhì)體在轉(zhuǎn)染效率上有差異。根據(jù)細(xì)胞類型和實(shí)驗(yàn)?zāi)康倪x擇合適的脂質(zhì)體試劑。例如,一些脂質(zhì)體含有特殊的功能成分,如靶向基團(tuán)可以增強(qiáng)與特定細(xì)胞的結(jié)合,或者具有促進(jìn)內(nèi)吞體逃逸的成分,從而提高轉(zhuǎn)染效率。新型的脂質(zhì)體制劑不斷涌現(xiàn),如含有可電離陽(yáng)離子脂質(zhì)的脂質(zhì)體,在生理 pH 條件下呈電中性,減少與血清蛋白的相互作用,進(jìn)入酸性的內(nèi)體后帶正電,更有利于與內(nèi)體膜融合,釋放核酸,在提高轉(zhuǎn)染效率的同時(shí)降低細(xì)胞毒性。 轉(zhuǎn)染時(shí)推薦使用血清減少或無(wú)血清培養(yǎng)基包括陽(yáng)離子轉(zhuǎn)染試劑,如Lipofectamine、HiperFect 和EndofectinMax。西安轉(zhuǎn)染試劑定制
開(kāi)發(fā)新型動(dòng)物搖籃可以實(shí)現(xiàn)小動(dòng)物的多重成像,提高成像效率。開(kāi)發(fā)新型動(dòng)物搖籃的小動(dòng)物多重成像方式:采集和評(píng)估高通量多鼠成像:KimHunnyun、ImGeunHo和YoonYeup開(kāi)發(fā)了一種可以修改和調(diào)整以適應(yīng)多種成像模型的新型動(dòng)物搖籃4。與以往只能成像一只小鼠的搖籃不同,這個(gè)新的搖籃可以同時(shí)成像四只小鼠,還可以獲取具有PET/MRI和PET/CT圖像的高吞吐量多鼠成像的融合圖像。通過(guò)將PET動(dòng)態(tài)成像技術(shù)應(yīng)用于高吞吐量MMI方法,還可以同時(shí)獲取動(dòng)態(tài)腦圖像。七、紅外成像技術(shù)在畜牧業(yè)中的應(yīng)用紅外成像技術(shù)在畜牧業(yè)中具有廣泛的應(yīng)用前景。Infraredimaginganewnon-invasivemachinelearningtechnologyforanimalhusbandry:ManaseeChoudhury、TulikaSaikia和SantanuBanik介紹了紅外成像技術(shù)在畜牧業(yè)中的應(yīng)用5。紅外熱成像技術(shù)因其非侵入性、易于自動(dòng)化和高靈敏度等特點(diǎn),在動(dòng)物疾病檢測(cè)和緩解方面的應(yīng)用越來(lái)越***。該技術(shù)可以確認(rèn)***動(dòng)物身體部位溫度的升高,還可用于檢測(cè)排卵、雄性生育力、應(yīng)激水平、肉質(zhì)、種群規(guī)模等。由于其易于操作,可以作為疾病診斷的**篩查工具,但仍需要進(jìn)一步研究以獲得更準(zhǔn)確的診斷結(jié)果。北京干細(xì)胞轉(zhuǎn)染試劑肌內(nèi)注射脂質(zhì)體不能引起強(qiáng)烈的毒性反應(yīng),這與肺內(nèi)或靜脈注射途徑的情況不同。
聯(lián)合使用其他技術(shù)優(yōu)化DNA和RNA轉(zhuǎn)移的轉(zhuǎn)染試劑在肌肉細(xì)胞中的應(yīng)用:在C2C12細(xì)胞中,比較了五種商業(yè)轉(zhuǎn)染試劑(Lipofectamine®3000、Viafect?、Fugene®HD、C2C12CellAvalanche®和JetOPTIMUS®)的轉(zhuǎn)染效率7。通過(guò)優(yōu)化DNA:轉(zhuǎn)染劑比例和細(xì)胞密度,所有試劑都達(dá)到了超過(guò)60%的轉(zhuǎn)染效率,且對(duì)細(xì)胞生長(zhǎng)和活力的影響有限。然而,在C2C12細(xì)胞中優(yōu)化的用于DNA轉(zhuǎn)移的條件下,這些試劑對(duì)siRNA的轉(zhuǎn)移效率較低,并且對(duì)原代肌肉細(xì)胞的毒性較高。這提示在使用轉(zhuǎn)染試劑時(shí),可以通過(guò)聯(lián)合使用其他技術(shù)或優(yōu)化轉(zhuǎn)染條件,以提高轉(zhuǎn)染效率并降低細(xì)胞死亡。例如,可以進(jìn)一步研究不同試劑之間的聯(lián)合使用,或者優(yōu)化轉(zhuǎn)染后的培養(yǎng)條件,以降低細(xì)胞毒性。綜上所述,在不同細(xì)胞模型中提高RNA轉(zhuǎn)染試劑的轉(zhuǎn)染效率同時(shí)降低細(xì)胞死亡,可以通過(guò)選擇合適的轉(zhuǎn)染試劑、優(yōu)化轉(zhuǎn)染條件以及聯(lián)合使用其他技術(shù)等方法來(lái)實(shí)現(xiàn)。未來(lái)的研究可以進(jìn)一步深入探討不同細(xì)胞模型中比較好的轉(zhuǎn)染策略,以滿足不同研究領(lǐng)域的需求。
選擇**適合的RNA轉(zhuǎn)染試劑是一個(gè)復(fù)雜的過(guò)程,需要綜合考慮多個(gè)因素。以下是一些關(guān)鍵的考慮因素和方法來(lái)幫助選擇**適合的RNA轉(zhuǎn)染試劑。一、考慮轉(zhuǎn)染效率轉(zhuǎn)染效率是選擇RNA轉(zhuǎn)染試劑的重要指標(biāo)之一。較高的轉(zhuǎn)染效率可以確保更多的細(xì)胞成功攝取和表達(dá)RNA。實(shí)驗(yàn)細(xì)胞類型:不同的細(xì)胞類型對(duì)轉(zhuǎn)染試劑的敏感性可能不同。例如,一些細(xì)胞系可能更容易被某些轉(zhuǎn)染試劑轉(zhuǎn)染,而另一些細(xì)胞則可能對(duì)不同的試劑更敏感。在腎*細(xì)胞系786-O和ACHN中,微小RNA-1180(miR-1180)轉(zhuǎn)染后,通過(guò)實(shí)時(shí)定量PCR和Westernblot等方法檢測(cè)到p21mRNA和蛋白表達(dá)的變化,表明該轉(zhuǎn)染在腎*細(xì)胞中有一定的效果1。在乳腺*細(xì)胞系T47D和非*性細(xì)胞MCF-10A中,研究比較了Lipofectamine2000和PAMAMG5兩種轉(zhuǎn)染試劑對(duì)短RNA的轉(zhuǎn)染效率,結(jié)果顯示Lipofectamine的轉(zhuǎn)染效率明顯高于PAMAMdendrimer2。檢測(cè)方法:可以使用多種方法來(lái)檢測(cè)轉(zhuǎn)染效率,如熒光顯微鏡、流式細(xì)胞儀分析、實(shí)時(shí)定量PCR等。例如,在脂質(zhì)體方法用于modRNA轉(zhuǎn)染各種類型細(xì)胞的初步研究中,分別用RNAiMax及MessageMax將modGFP轉(zhuǎn)染入MEF細(xì)胞,應(yīng)用熒光顯微鏡、流式細(xì)胞分析儀檢測(cè)并比較兩種轉(zhuǎn)染試劑的轉(zhuǎn)染效率和蛋白表達(dá)效果5。PHP是由天然來(lái)源的羥基脯氨酸(如膠原蛋白、明膠和其他蛋白質(zhì))制成的,是一個(gè)用作基因載體的聚酯。
對(duì)細(xì)胞活力的影響:一些研究表明,在陽(yáng)離子脂質(zhì)體LipofectamineTM2000介導(dǎo)下雞TRPV6基因RNA干擾(RNAi)質(zhì)粒轉(zhuǎn)染入成骨細(xì)胞的實(shí)驗(yàn)中,當(dāng)轉(zhuǎn)染前細(xì)胞融合達(dá)到90%以上,質(zhì)粒DNA與脂質(zhì)體比例為1:2.5時(shí)轉(zhuǎn)染效率比較高,并且在轉(zhuǎn)染后48h轉(zhuǎn)染效果比較好,對(duì)細(xì)胞的毒性作用較小3。在人肝瘤兩種細(xì)胞模型中,通過(guò)比較LipofectamineRnaimax和Genmute轉(zhuǎn)染劑發(fā)現(xiàn),用基因***的細(xì)胞呈現(xiàn)熒光陰性對(duì)照siRNA的更高攝取,并且觀察到與基因轉(zhuǎn)染的細(xì)胞相對(duì)于脂質(zhì)積rnaimax的細(xì)胞具有較高的活力6。有研究使用兩種常見(jiàn)的RNA干擾(RNAi)轉(zhuǎn)染試劑DharmaFECT1和INTERFERin,在模擬轉(zhuǎn)染中使用非靶向siRNAs,結(jié)果表明這些試劑會(huì)引起HeLa細(xì)胞脂質(zhì)組的變化,但功能影響仍有待研究,這也暗示在RNAi實(shí)驗(yàn)中使用適當(dāng)?shù)哪M轉(zhuǎn)染對(duì)照非常重要。
作為一般指導(dǎo)原則,建議使用早期傳代的細(xì)胞以獲得良好的轉(zhuǎn)染效率,特別是涉及原代或干細(xì)胞的轉(zhuǎn)染。北京干細(xì)胞轉(zhuǎn)染試劑
并被困在核內(nèi)小體中,從這些囊泡結(jié)構(gòu)中釋放出來(lái),進(jìn)入核周區(qū)域,后進(jìn)入細(xì)胞核。西安轉(zhuǎn)染試劑定制
熱成像技術(shù)在動(dòng)物檢測(cè)方面也具有很大的潛力。AnimaldetectionusingthermalimagingandaUAV:Rafa?Fr?ckowiak和Z.Goraj的研究測(cè)試了多旋翼無(wú)人機(jī)搭配熱成像相機(jī)用于檢測(cè)大型野生動(dòng)物的方法2。他們?cè)诓ㄌm的CzarnaBialostocka森林區(qū)進(jìn)行了研究,選用了視角為33°×26.6°、熱傳感器分辨率為640×512像素的熱成像相機(jī)E20TvxYuneec,并以YuneecH520E六旋翼無(wú)人機(jī)作為搭載工具。研究結(jié)果表明,熱成像相機(jī)在檢測(cè)和識(shí)別大型野生動(dòng)物方面具有潛力,如歐亞麋鹿和馬鹿等。在2022年冬季,還能夠確定馬鹿的性別。三、X射線發(fā)光成像技術(shù)X射線發(fā)光成像技術(shù)結(jié)合了X射線成像的高空間分辨率和光學(xué)成像的高測(cè)量靈敏度,可用于小動(dòng)物成像。小動(dòng)物的X射線發(fā)光成像:MichaelCLun、WenxiangCong和Md.Arifuzzaman綜述了兩種類型的X射線發(fā)光計(jì)算斷層掃描(XLCT)成像方法,并介紹了他們正在建立的聚焦X射線發(fā)光斷層掃描(FXLT)成像系統(tǒng)7。該系統(tǒng)將開(kāi)發(fā)基于機(jī)器學(xué)習(xí)的FXLT重建算法,并合成不同發(fā)射波長(zhǎng)的納米級(jí)磷光劑。西安轉(zhuǎn)染試劑定制