考慮多因子轉(zhuǎn)染能力如果實驗需要同時轉(zhuǎn)染多個RNA分子或進行共轉(zhuǎn)染實驗,那么選擇具有多因子轉(zhuǎn)染能力的試劑是重要的。共轉(zhuǎn)染效果:一些轉(zhuǎn)染試劑可以有效地實現(xiàn)多個RNA分子的共轉(zhuǎn)染,而另一些試劑可能在共轉(zhuǎn)染方面效果不佳。在脂質(zhì)體方法用于modRNA轉(zhuǎn)染各種類型細胞的初步研究中,MessageMax能將modGFP高效轉(zhuǎn)染入多種細胞中,并實現(xiàn)modGFP和modmCherry在MEF細胞中的共轉(zhuǎn)及核內(nèi)因子nGFP和mTBX5在MEF細胞核中的定位5。選擇適合多因子轉(zhuǎn)染的試劑:根據(jù)實驗需求,選擇能夠滿足多因子轉(zhuǎn)染要求的轉(zhuǎn)染試劑。例如,如果實驗需要同時轉(zhuǎn)染多個基因或進行基因編輯實驗,那么選擇具有多因子轉(zhuǎn)染能力的轉(zhuǎn)染試劑可以提高實驗效率。與DNA轉(zhuǎn)染類似,RNA可以通過基于RNA的病毒或非病毒載體導(dǎo)入真核細胞。中國澳門合肥轉(zhuǎn)染試劑
考慮細胞毒性低細胞毒性的轉(zhuǎn)染試劑對于保持細胞的活性和正常生理功能至關(guān)重要。評估細胞活力:可以通過檢測細胞的存活率、增殖能力等指標來評估轉(zhuǎn)染試劑的細胞毒性。在研究不同轉(zhuǎn)染試劑對C2C12細胞的轉(zhuǎn)染效率時,通過優(yōu)化DNA:轉(zhuǎn)染劑比例和細胞密度,使所有試劑在達到較高轉(zhuǎn)染效率的同時,對細胞生長和活力的影響有限6。在比較不同轉(zhuǎn)染試劑遞送siRNA的攝取、敲低效率和毒性情況的研究中,新開發(fā)的CALNPRNAi轉(zhuǎn)染試劑轉(zhuǎn)染效率***高于傳統(tǒng)轉(zhuǎn)染試劑,同時毒性比較低7。選擇溫和的試劑:一些轉(zhuǎn)染試劑可能對細胞的毒性較小,例如基于脂質(zhì)的轉(zhuǎn)染試劑通常比基于病毒的轉(zhuǎn)染試劑更溫和。在顱內(nèi)遞送合成mRNA的研究中,使用常用的轉(zhuǎn)染試劑將合成mRNA遞送至小鼠大腦,結(jié)果表明該模型中合成mRNA可以成功遞送至大腦,且沒有可測量的毒性8。體內(nèi)轉(zhuǎn)染試劑優(yōu)惠提高 RNA 轉(zhuǎn)染效率的策略。
考慮RNA需求較少的RNA需求可以降低實驗成本,同時也可以減少對細胞的潛在毒性。比較不同試劑的RNA用量:不同的轉(zhuǎn)染試劑可能需要不同量的RNA才能達到相同的轉(zhuǎn)染效果。在選擇比較好的RNA轉(zhuǎn)染試劑并將其與電穿孔法進行病毒RNA的比較的研究中,某些商業(yè)轉(zhuǎn)染試劑在適當(dāng)優(yōu)化后,細胞死亡少得多,RNA需求少,轉(zhuǎn)染效率提高3??紤]實驗規(guī)模:如果實驗需要大量轉(zhuǎn)染細胞,那么選擇RNA需求較少的試劑可以降低成本。例如,在大規(guī)模的細胞培養(yǎng)實驗中,選擇RNA需求少的轉(zhuǎn)染試劑可以節(jié)省成本和資源。四、考慮血清兼容性在有血清的情況下能夠遞送RNA的轉(zhuǎn)染試劑可以簡化實驗操作,提高實驗的可重復(fù)性。血清對轉(zhuǎn)染的影響:一些轉(zhuǎn)染試劑在有血清的情況下可能會降低轉(zhuǎn)染效率,而另一些試劑則可以在血清存在的情況下正常工作。在比較不同商業(yè)RNA轉(zhuǎn)染試劑將黃熱病病毒(YFV)和丙型肝炎病毒(HCV)RNA復(fù)制子遞送至Huh7細胞的能力的研究中,討論了與高效轉(zhuǎn)染相關(guān)的因素,以及在存在血清的情況下能夠遞送RNA的優(yōu)勢3。選擇血清兼容的試劑:如果實驗需要在有血清的條件下進行,那么選擇血清兼容的轉(zhuǎn)染試劑是必要的。例如,在一些細胞培養(yǎng)實驗中,血清是細胞生長所必需的。
電轉(zhuǎn)染方式:機制概述:電轉(zhuǎn)染是利用電場作用使細胞膜產(chǎn)生可逆性的通透性增加,從而使RNA分子能夠進入細胞。在適當(dāng)?shù)碾妶鰲l件下,細胞膜上會形成微孔,RNA分子通過這些微孔進入細胞。當(dāng)電場消失后,細胞膜會逐漸恢復(fù)正常狀態(tài)。在不同細胞類型中的表現(xiàn):在人脂肪干細胞(hADSC)中,Optimization6電轉(zhuǎn)方式轉(zhuǎn)染hADSC的效率高于其他電轉(zhuǎn)染方式(Optimization4)和脂質(zhì)體轉(zhuǎn)染試劑RNAiMAX。熒光顯微鏡觀察及流式分析均表明電轉(zhuǎn)染方式的蛋白表達優(yōu)于RNAiMAX脂質(zhì)體轉(zhuǎn)染。這說明電轉(zhuǎn)染方式在hADSC中能夠更有效地將modRNA轉(zhuǎn)染入細胞,并實現(xiàn)特定蛋白的表達10。魚精蛋白相關(guān)轉(zhuǎn)染試劑:機制概述:魚精蛋白是一種天然陽離子肽混合物,可用于穩(wěn)定和遞送核酸,包括信使RNA(mRNA)等。當(dāng)與RNA混合時,魚精蛋白會自發(fā)地產(chǎn)生粒徑在20-1000nm范圍內(nèi)的顆粒,這些顆粒可用于疫苗接種和免疫刺激。不同等級的魚精蛋白在與mRNA形成復(fù)合物時表現(xiàn)出不同的轉(zhuǎn)染能力,其轉(zhuǎn)染機制可能與魚精蛋白的來源等因素有關(guān)。在不同細胞類型中的表現(xiàn):魚精蛋白相關(guān)轉(zhuǎn)染試劑在多種細胞類型中的具體表現(xiàn)目前文獻中未詳細提及,但研究表明不同來源的魚精蛋白制劑在其組成和轉(zhuǎn)染mRNA的能力上存在很大差異。不同種類的納米顆粒轉(zhuǎn)染細胞系后,產(chǎn)生不同的效率、毒性和組織特異性。
磁共振成像(MRI)技術(shù)磁共振成像技術(shù)是目前較為先進的醫(yī)學(xué)影像技術(shù)之一,在動物成像中也得到了廣泛應(yīng)用。優(yōu)化實驗動物眼部磁共振成像技術(shù):王戰(zhàn)京、雷建鋒、焦昆的研究通過改進實驗動物眼部的磁共振成像技術(shù),提高了眼科疾病研究的準確性,并促進了新治療方法的研發(fā)1。他們選用了健康的SD大鼠,利用Bruker7.0TMRI掃描儀進行檢測,通過精確的定位和細致的掃描參數(shù)調(diào)整,對比了T2WI與FLASH兩種成像技術(shù)。研究結(jié)果顯示,F(xiàn)LASH序列在眼部結(jié)構(gòu)成像中展現(xiàn)出更高的信噪比,從而提供了更為清晰的圖像和更豐富的組織細節(jié)。3T動物磁共振成像傳導(dǎo)冷卻超導(dǎo)磁體研究:陳順中、王秋良、孫萬碩采用傳導(dǎo)冷卻技術(shù)研制了一臺3T動物磁共振成像超導(dǎo)磁體9。該磁體采用主動屏蔽型結(jié)構(gòu),包含同軸排列的6個主線圈和2個屏蔽線圈。研究還采用了分段和失超傳播加速策略的被動失超保護方法,保護超導(dǎo)磁體免于意外失超造成的損害。低溫系統(tǒng)使用雙極G-M制冷機直接將超導(dǎo)磁體從室溫冷卻到工作溫度,無需液氦。實驗結(jié)果顯示,該超導(dǎo)磁體在直徑φ180mm的球形區(qū)域產(chǎn)生高均勻度磁場用于成像。由于CRISPR/Cas的發(fā)現(xiàn),基因組編輯領(lǐng)域經(jīng)歷了一場變革。上海轉(zhuǎn)染試劑幫轉(zhuǎn)染
脂質(zhì)復(fù)合物又稱陽離子脂質(zhì)-核酸復(fù)合物(CLNACs)。中國澳門合肥轉(zhuǎn)染試劑
其他轉(zhuǎn)染試劑:機制概述:例如CALNPRNAi轉(zhuǎn)染試劑,其轉(zhuǎn)染機制可能與傳統(tǒng)轉(zhuǎn)染試劑不同。該試劑轉(zhuǎn)染效率***高于傳統(tǒng)轉(zhuǎn)染試劑,同時毒性比較低。其具體轉(zhuǎn)染機制可能涉及對RNA的攝取、細胞利用率及細胞毒性的綜合作用。在不同細胞類型中的表現(xiàn):目前文獻中未明確提及CALNPRNAi轉(zhuǎn)染試劑在特定細胞類型中的具體表現(xiàn),但研究表明該試劑為難轉(zhuǎn)染細胞的RNA干擾帶來了新的選擇7。綜上所述,不同RNA轉(zhuǎn)染試劑在不同細胞類型中的轉(zhuǎn)染機制存在差異,這些差異主要表現(xiàn)在與RNA的結(jié)合方式、進入細胞的途徑以及在細胞內(nèi)的釋放和作用方式等方面。了解這些差異對于選擇合適的轉(zhuǎn)染試劑進行特定細胞類型的RNA轉(zhuǎn)染實驗具有重要意義。中國澳門合肥轉(zhuǎn)染試劑