湖南外泌體熒光染料

在1990年代***使用的綠色熒光蛋白（從水母維多利亞水母克?。┘捌溲苌铮ɡ缭寮t藍蛋白、藻膽蛋白和藻紅蛋白等）是當今生物學研究中**常用的一些生物熒光團。雖然熒光團可用于在細胞、細菌和各種***中表達質粒，但它們的使用有一些缺點，即它可能很耗時，并且在融合時還能夠改變某些細胞蛋白的正常生物學功能。此外，與許多其他熒光團相比，生物熒光團的光穩(wěn)定性和靈敏度較低。綠色熒光蛋白(GFP)綠色熒光蛋白是當下流行的生物熒光團之一，由238個氨基酸組成，其中三個負責發(fā)出可見綠色熒光的結構。在水母本身中，熒光團與水母發(fā)光蛋白（一種蛋白質）相互作用，當添加鈣時會發(fā)出藍光。通過DNA重組，研究人員可以使用負責產生蛋白質的基因來研究給定的基因和蛋白質。在這里，在將復合物插入細胞之前，該基因與另一個基因（負責產生所需蛋白質的第二個基因）結合。如果細胞產生綠色熒光，研究人員就可以明顯看出該細胞能夠表達目標基因。GFP由488nm激光線激發(fā)，可在510nm處檢測。來自熒光團的微弱信號可以使用抗GFP抗體放大。作為生物標記物，綠色熒光蛋白用于以下功能：監(jiān)測各種生理過程*識別蛋白質定位*檢測轉基因表達Cy5.5含有一個游離胺基,可與多種官能團共軛,包括NHS酯和環(huán)氧化合物。湖南外泌體熒光染料

Hoechst33258是一種可以穿透細胞膜的藍色熒光染料，對細胞的毒性較低。用于細胞核染色時，推薦的Hoechst33258工作濃度為0.5-10μg/ml。儲存條件：-20℃干燥避光保存，有效期一年。注意事項：Hoechst33258對人體有害，請注意適當防護。熒光染料都存在淬滅的問題，建議染色后盡量當天完成檢測。為減緩熒光淬滅可以使用抗熒光淬滅封片液。抗熒光淬滅封片液(P0126)可以向碧云天訂購。為了您的安全和健康，請穿實驗服并戴一次性手套操作注意事項：Hoechst33342對人體有一定刺激性，請注意適當防護。熒光染料都存在淬滅的問題，建議染色后盡量當天完成檢測。為減緩熒光淬滅可以使用抗熒光淬滅封片液。為了您的安全和健康，請穿實驗服并戴一次性手套操作。湖南外泌體熒光染料熒光素的衍生物包括異硫氰酸熒光素、俄勒岡綠和羧基萘并熒光素等。

三：貼壁細胞染色1、將貼壁細胞培養(yǎng)于無菌蓋玻片上。2、從培養(yǎng)基中移走蓋玻片，吸走過量培養(yǎng)液，但要使表面保持濕潤。3、在蓋玻片的一角加入100μL的染料工作液，輕輕晃動使染料均勻覆蓋所有細胞。4、37℃孵育細胞2~20min，不同的細胞比較好培養(yǎng)時間不同?？梢?0min作為起始孵育時間，之后優(yōu)化體系以得到均一的標記效果。5、吸干染料工作液，用培養(yǎng)液洗蓋玻片2~3次，每次用預溫的培養(yǎng)基覆蓋所有細胞，孵育5~10min，然后吸干培養(yǎng)基。但要使表面保持濕潤。四：結果檢測樣品可在培養(yǎng)基中進行檢測，可通過熒光顯微鏡成像或流式細胞儀分析。

CY7是一種CY染料。CY為花菁(Cyanine)的縮寫，是由奇數(shù)個甲基單元連接的兩個氮原子組成的化合物。菁類化合物具有波長長、吸收和發(fā)射可調、消光系數(shù)高的特點CY系染料常被用于蛋白、抗體以及小分子化合物的標記，對于蛋白抗體的標記，可以通過簡單的混合反應來完成結合，下面我們介紹了蛋白抗體標記的標記方法，具有一定的參考意義。一、比較好蛋白制備1)為獲得標記效果，請制備蛋白(抗體)濃度為2mg/mL。2)蛋白溶液的pH值為8.5±0.5。如果pH值低于8.0，應使用1M3)如果蛋白濃度低于2mg/mL，標記效率會**降低。為獲得比較好標記效率，建議**終蛋白濃度范圍為2-10mg/mL。4)蛋白必須在不含伯胺(如Tris或甘氨酸)的緩沖液中，和銨離子，否則會影響標記效率。2.染色制備(以CY3-NHS酯為例)將無水DMSO加入CY3-NHS酯小瓶中，制備成10mM儲備液。通過移液器或渦旋混合均勻計算。使用前需先使用縮合液(500μg/mL)(HY-D0178)活化另一個可進行后續(xù)標記實驗。Cy3 (Cyanine 3) 是一種發(fā)橘黃色熒光的花青素熒光染料。

為什么要使用熒光染料？雖然不同的染色技術（即考馬斯染色、銀染色、熒光染色）可用于可視化凝膠電泳分離的蛋白質，但使用熒光染料具有其獨特的優(yōu)勢。他們提供：高靈敏度：對于大多數(shù)分析物，熒光測量的靈敏度比吸光度測量高1000倍，即使在使用小樣本時也可以令人滿意地達到ppt（萬億分之一）的檢測限。寬線性動態(tài)范圍。輸出與樣品濃度成正比。低干擾：由于吸收光的材料數(shù)量眾多，分光光度測量通常會遇到干擾問題。在進行熒光測量時不會遇到這個問題，因為只有少數(shù)材料具有熒光能力。高通量：熒光測量具有簡單而強大的協(xié)議，并且可以自動化用于高通量應用。PI常用于細胞凋亡(apoptosis)或細胞壞死(necrosis)的檢測，常用于流式細胞儀分析。湖南外泌體熒光染料

生物發(fā)光是利用熒光素酶報告基因在體內表達產生的熒光蛋白與體外注射的熒光素底物發(fā)生化學反映產生熒光。湖南外泌體熒光染料

D-熒光素是熒光素酶 (Luc) 的天然底物，可催化螢火蟲產生典型的黃綠色光。該反應的 560 nm 化學發(fā)光在幾秒鐘內達到峰值，當?shù)孜餆晒馑剡^量時，光輸出與熒光素酶濃度成正比。熒光素酶 (luc) 基因是用于研究和藥物篩選的流行報告基因。化學發(fā)光技術幾乎沒有背景，使得 luc 報告基因成為檢測低水平基因表達的理想選擇。標準閃爍計數(shù)器可以可靠地測量低至 0.02 pg 的熒光素酶。除了作為基因表達報告者的作用外，熒光素酶還常用于極其靈敏的 ATP 檢測中[1]。我們提供螢火蟲熒光素酶 (HY-P1004)、熒光素游離酸 (HY-12591A) 及其水溶性鈉鹽 (HY-12591) 和鉀鹽 (HY-12591B)。湖南外泌體熒光染料