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三、細胞實驗D-熒光素鉀鹽體外生物發(fā)光試驗：D-熒光素鉀鹽，無菌純水，完全培養(yǎng)基（自行配制）1、貼壁細胞：將細胞接種于培養(yǎng)板中孵育數(shù)小時或過夜，使細胞貼壁。懸浮細胞：可以將細胞接種于培養(yǎng)板后直接進行后續(xù)操作，無需孵育。如果倍增時間相對較短，則應(yīng)考慮倍增時間進行細胞計數(shù)。2、將15mg熒光素鉀鹽溶解于1ml無菌水中，制備成100X熒光素儲備液（15mg/ml），輕輕顛倒搖動至熒光素鉀鹽完全溶解?；靹蚝罅⒓词褂没蚍盅b后-20℃凍存。3、用預(yù)熱好的細胞培養(yǎng)基1∶100稀釋100X熒光素儲備液（15mg/ml），配制成熒光素工作液（終濃度150μg/ml），即配即用。4、去除培養(yǎng)板中的培養(yǎng)基。5、在成像前，將適量熒光素工作液加入細胞中，然后進行圖像分析。注意：成像前在37℃下對細胞進行短時間孵育可增強信號。孵育時間取決于特定的細胞類型。一般來說孵育10分鐘就足夠了，根據(jù)需要進行測試和調(diào)整。6、每隔10分鐘，**多40分鐘，使用VILBERFUSIONFX成像系統(tǒng)檢查體外生物發(fā)光，確定動力學(xué)曲線并找出細胞的峰值成像時間點CY7.5熒光染料是一種被廣泛應(yīng)用于生物分子檢測和熒光成像等領(lǐng)域的高效、穩(wěn)定的熒光標記試劑。內(nèi)蒙古顯微鏡熒光染料

一種發(fā)光雜環(huán)化合物，存在于生物發(fā)光的生物體中，如螢火蟲。在含有三磷酸腺苷的情況下，通過熒光素酶氧化脫羧產(chǎn)生光?？捎糜跓晒馑孛干锇l(fā)光成像和細胞高通量篩選應(yīng)用。D-熒光素（D-Luciferin）是螢火熒光素酶底物，其量子效率為0.88，是Luminol的20倍。反應(yīng)原理：首先，在鎂離子存在下熒光素酶使熒光素與ATP反應(yīng)，接著它被氧化形成二氧雜環(huán)丁烷結(jié)構(gòu)并發(fā)出黃綠色的光。Luciferin-luciferase發(fā)光用于ATP監(jiān)控以測定細胞活力以及細菌計數(shù)。它還用于報告基因檢測?？膳c小動物***成像系統(tǒng)配套使用，用于標記LUC基因后的體內(nèi)***熒光檢測。D-熒光素游離酸（D-Luciferin,freeacid）、D-熒光素鉀鹽（D-Luciferin,potassiumsalt）和D-熒光素鈉鹽（D-Luciferin,sodiumsalt），鉀鹽、鈉鹽的形式是**通用的，因為它們都易溶于水。鉀鹽也是***動物檢測使用的主要形式。它們的激發(fā)和發(fā)射波長分別為328nm和533nm。顯微鏡熒光染料高分子羰花青染料用作 Di 來標記細胞、細胞器、脂質(zhì)體、病毒和脂蛋白。

選擇熒光染料時要考慮那些因素：激發(fā)波長處的消光系數(shù)應(yīng)盡可能高：消光系數(shù)是衡量可以吸收多少光子的量度。量子產(chǎn)率應(yīng)該盡可能高：這是吸收光子與發(fā)射光子的比率。消光系數(shù)和量子產(chǎn)率的乘積就是亮度。熒光染料應(yīng)該是光穩(wěn)定的：遺憾的是，比較不同公司染料的光穩(wěn)定性的研究并不多。光致變色行為：對于STORM實驗，您需要一個閃爍的熒光團。但是，對于分子跟蹤實驗，您***不想要閃爍的熒光團?；?死細胞滲透性。您想要的反應(yīng)側(cè)基（例如HaloTag、抗體等）。當(dāng)您使用多個熒光探針時，尤其是當(dāng)您量化共定位時，請謹慎處理其他顏色通道中的滲色。單獨測試所有熒光探針以評估滲透。

一、體外生物發(fā)光試驗熒光素試劑的制備：D-熒光素，鉀鹽，無菌純水，完全培養(yǎng)基（自行配置）1、用無菌水制備100X熒光素原液（15mg/ml），輕輕顛倒搖動至熒光素完全溶解?；靹蚝罅⒓词褂没蚍盅b后-20℃凍存。2、將D-luciferin，potassiumsalt溶解于預(yù)熱好的組織培養(yǎng)基中制備成濃度為150μg/ml的工作液。用組織培養(yǎng)基1∶100稀釋儲存液，配置工作液(終濃度150μg/mL)3、去除培養(yǎng)細胞的培養(yǎng)基圖像分析前，向細胞培養(yǎng)板中添加1×熒光素工作液，然后進行圖像分析-注射器濾膜過濾除菌，0.2μm注：成像前在37℃下對細胞進行短時間孵育可增強信號。Cy3染料的激發(fā)峰和發(fā)射峰分別在550 nm和570 nm左右。

熒光染料在細胞實驗中具有廣泛的應(yīng)用1、細胞膜標記：可以使用熒光染料標記細胞膜，以觀察和研究細胞膜的動態(tài)和結(jié)構(gòu)變化。2、染色體和DNA標記：用熒光染料標記染色體或DNA，可以觀察和分析DNA復(fù)制、轉(zhuǎn)錄、修復(fù)等過程3、蛋白質(zhì)標記：通過熒光染料標記蛋白質(zhì)，可以研究蛋白質(zhì)的相互作用、定位和運動等特性。4、細胞器標記：使用特定波長的熒光染料可以標記和可視化細胞中的線粒體、溶酶體等細胞器。5、神經(jīng)科學(xué)應(yīng)用：熒光染料在神經(jīng)科學(xué)中也有廣泛應(yīng)用，如標記神經(jīng)元和突觸，觀察神經(jīng)信號的傳遞等。6、基因表達分析：通過熒光染料標記基因表達產(chǎn)物，可以定量分析基因的表達水平和細胞中的分布情況。南京星葉生物熒光染料標記蛋白。青海熒光染料luc

D-熒光素（D-Luciferin）是螢火熒光素酶底物，其量子效率為0.88，是Luminol的20倍。內(nèi)蒙古顯微鏡熒光染料

熒光標記技術(shù)是指運用熒光染料與待研究對象結(jié)合，利用它的熒光特性，提供待研究對象相關(guān)信息。熒光標記具有操作簡便、高穩(wěn)定性、高靈敏度等優(yōu)勢，使熒光染料在生命科學(xué)研究中應(yīng)用，包括：標記活細胞或固定細胞中的蛋白質(zhì)、多肽；作為功能性指示劑表征細胞健康狀況；設(shè)計各種熒光探針，尋找特定蛋白或藥物靶點。應(yīng)用分類：多肽、蛋白、抗體標記：氨基標記、巰基標記、羧基標記；***成像：水溶性/脂溶性熒光染料、近紅外I區(qū)/II區(qū)熒光染料南京星葉生物科技有限公司提供不同用途的熒光染料，了解更多（包括但不限于）

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