天津PEI 轉(zhuǎn)染試劑

轉(zhuǎn)染試劑的凍融被認為是另一個可能影響轉(zhuǎn)染效率的潛在因素。Lipofectamine2000試劑與非冷凍對照相比，至少經(jīng)歷一次凍融循環(huán)后，HEK293、Neuro2α、C2C12成肌細胞和肌管、hTERTMSC、SMA和HepG2細胞系的轉(zhuǎn)染效率更高，且細胞活力不受影響。一種可能的解釋是，冷凍解凍可以增強分子重排分散，從而允許更高的分散率，從而允許核酸之間很大程度的接觸，形成更多的轉(zhuǎn)染復(fù)合物。然而，還需要更多的研究來支持這一做法，因為凍融過程也被認為會導(dǎo)致再結(jié)晶，從而破壞一些化學(xué)物質(zhì)的結(jié)構(gòu)。超聲輔助轉(zhuǎn)染涉及在宿主細胞膜上制造微小的孔，以促進核酸(包括DNA和RNA)的傳遞。天津PEI 轉(zhuǎn)染試劑

超聲輔助轉(zhuǎn)染涉及在宿主細胞膜上制造微小的孔，以促進核酸(包括DNA和RNA)的傳遞。與前一種策略類似，超聲照射的暴露時間、脈沖數(shù)和密度也被報道與轉(zhuǎn)染效率成比例相關(guān)，直至達到閾值。超過耐受極限，細胞存活率和轉(zhuǎn)染效率可能會下降。同樣，增加核酸的數(shù)量也可以提高超聲輔助轉(zhuǎn)染的轉(zhuǎn)染效率。在同一項研究中，超聲轉(zhuǎn)染懸浮培養(yǎng)的人293T細胞比轉(zhuǎn)染貼壁培養(yǎng)的相同細胞類型更容易。然而，這一觀察結(jié)果與另一項研究的結(jié)果不一致，該研究報告在懸浮或單層條件下培養(yǎng)的轉(zhuǎn)染大鼠細胞數(shù)量沒有***差異。值得注意的是，后一項研究還報道了單層培養(yǎng)的大鼠細胞在轉(zhuǎn)染后保持較高的細胞活力。然而，這兩項研究的不一致結(jié)果表明，超聲穿孔的比較好培養(yǎng)條件可能因使用的細胞系不同而異。在另一項研究中表明超聲轉(zhuǎn)染效率因使用的細胞類型而異，Hela和T-24細胞系的超聲轉(zhuǎn)染效率優(yōu)于PC-3、U937和Meth A細胞系。因此，細胞類型的選擇是影響超聲轉(zhuǎn)染效率的另一個因素。天津PEI 轉(zhuǎn)染試劑研究人員集中研究了將合成t細胞免疫原作為DNA疫苗使用的方法。

納米顆粒，由于其在DNA轉(zhuǎn)運到細胞中的保護能力，在不久的將來可以用作轉(zhuǎn)基因的非病毒載體。通過將納米粒子與許多不同的配體和化合物連接來修飾納米粒子，有助于改善它們在細胞內(nèi)的運輸。將納米顆粒靶向到細胞內(nèi)的特定位置，配子和胚胎，可以通過磁轉(zhuǎn)染來實現(xiàn)。盡管與市售的用于體外培養(yǎng)細胞的轉(zhuǎn)染試劑相比，使用納米顆粒轉(zhuǎn)染具有相當(dāng)?shù)男屎透偷募毎拘裕孕枰C明以這種方式傳遞DNA會導(dǎo)致體內(nèi)相似水平的基因表達，特別是考慮到該技術(shù)可能導(dǎo)致副作用。

在7種轉(zhuǎn)染試劑(DAC-30、DC-30、Lipofectin、LipofectAMINEPLUS、Effectene、FuGene 6和superect)中，F(xiàn)uGene 6轉(zhuǎn)染HASMCs和α-10 SMCs的效率比較高。在這兩種細胞系中，superect產(chǎn)生的細胞毒性作用比較高，其次是DAC-30和Lipofectamine Plus，而FuGene 6被認為對細胞系相對安全。在另一項比較人類和動物來源的不同細胞系轉(zhuǎn)染結(jié)果的研究中，豬氣管上皮細胞(PTE)被Effectene、Lipofectamine Plus和PEI等轉(zhuǎn)染試劑轉(zhuǎn)染的效率高于人類氣管上皮細胞(HTE)?；瘜W(xué)轉(zhuǎn)染后，轉(zhuǎn)染后的HTE也表現(xiàn)出比PTE更低的活力。兩項被引用研究的綜合結(jié)果認為動物細胞系可能比人類細胞系更有效地轉(zhuǎn)染。懸浮細胞通常被認為比貼壁細胞更難轉(zhuǎn)染，因為轉(zhuǎn)染復(fù)合物對細胞的潛在附著減少懸浮細胞表面。然而，一項比較Xfect、Lipofectamine2000、Nanofectamin、TransIT-X2和TransIT-2020效率的研究表明，除了Xfect之外，所有試劑轉(zhuǎn)染懸浮細胞的效率都高于貼壁細胞(Tammetal.，2016)。然而，相反觀察結(jié)果背后的原因在很大程度上仍不清楚，未來可能會進一步探索。核酸與轉(zhuǎn)染試劑的比例納米顆粒可以參與內(nèi)體途徑，并可以通過細胞質(zhì)將DNA運輸?shù)郊毎恕?/p>

PEI的分子量對細胞毒性和基因轉(zhuǎn)移活性有影響。由于PEI在細胞內(nèi)不可降解，所以分子量越高，細胞毒性越強。此外，具有較高分子量的PEI形成更穩(wěn)定的聚合物，使其更容易轉(zhuǎn)染，但更難在細胞內(nèi)釋放核酸。另一方面，PEI產(chǎn)生的復(fù)合物分子量降低，更難以轉(zhuǎn)染;但它更容易釋放核酸。因此，確定哪種分子量的PEI更有利是不能隨意實現(xiàn)的。然而，一些改進使PEI在應(yīng)用中更加先進。低分子量(LMW) PEI與可生物降解的骨架(如聚谷氨酸衍生物(PEG-b-PBLG))偶聯(lián)，可***降低細胞毒性并保持較高的轉(zhuǎn)染效率。通過用丙烯酸乙酯修飾胺，伯胺的乙酰化，或在聚合物結(jié)構(gòu)中引入帶負電荷的丙酸或琥珀酸基團，可以制備出各種無毒的分支PEI衍生物。由此產(chǎn)生的化學(xué)物質(zhì)在利用siRNA敲低靶基因方面非常成功。納米顆粒的主要特性使它們能夠用于細胞轉(zhuǎn)染。北京轉(zhuǎn)染試劑試用

為了在體外和體內(nèi)可重復(fù)地傳遞基因和siRNA，含有核酸的脂質(zhì)體、脂叢和多叢的配方需要精確組成轉(zhuǎn)染試劑。天津PEI 轉(zhuǎn)染試劑

脂質(zhì)復(fù)合物(CLNACs)通過網(wǎng)格蛋白參與的內(nèi)吞作用進入細胞，并被困在核內(nèi)小體中，從這些囊泡結(jié)構(gòu)中釋放出來，進入核周區(qū)域，***進入細胞核。內(nèi)吞作用在一定程度上取決于脂質(zhì)體載體的物理化學(xué)性質(zhì)。Friend和同事描述了可能由脂質(zhì)體與核膜融合而形成的囊泡和網(wǎng)狀核內(nèi)膜。**近有研究表明，很大一部分從核內(nèi)體釋放到細胞質(zhì)質(zhì)的質(zhì)粒由于與細胞質(zhì)中的大離子凝聚劑結(jié)合而失去活性。這可能解釋了脂質(zhì)轉(zhuǎn)染所觀察到的低且可變的轉(zhuǎn)染率。雖然這些脂質(zhì)載體從細胞外部到細胞核的路徑尚未完全確定，但核酸能夠產(chǎn)生其效果本身就是一項驚人的壯舉。至少對于質(zhì)粒而言，較小的結(jié)構(gòu)體比較大的質(zhì)粒具有更高的轉(zhuǎn)染率。核酸外排，雖然不是常見的報道，但也被證明會發(fā)生。天津PEI 轉(zhuǎn)染試劑