武漢熒光染料APC

Hoechst33342是一種可透過細胞膜并對DNA染色的細胞核染色試劑，它在嵌入雙鏈DNA后釋放強烈的藍色熒光。Hoechst33342常用于細胞凋亡檢測，染色后用熒光顯微鏡觀察或流式細胞儀檢測。Hoechst33342-DNA的激發(fā)和發(fā)射波長分別為350nm和460nm?？扇苡谒?。4.染色程序：（1）用PBS或合適的緩沖液制備10～50μMHoechst33342染料。（2）將1/10細胞培養(yǎng)基體積的Hoechst染料溶液加入細胞培養(yǎng)物中（可以用1/10濃度的Hoechst染料緩沖液代替培養(yǎng)基）。（3）在37℃培養(yǎng)細胞10～20分鐘。（4）用PBS或合適的緩沖液洗細胞兩次。（5）用帶有350nm激發(fā)波長，460nm發(fā)射波長的濾光片的熒光顯微鏡觀察細胞。異硫氰酸熒光素(FITC) 是一種有機熒光染料，目前，這種熒光染料仍用于免疫熒光和流式細胞術中。武漢熒光染料APC

三、流式細胞儀分析1、取對數生長期的細胞，接種到孔板，過夜培養(yǎng)。2、如果要進行藥物刺激，在細胞中加入感興趣的藥物進行干預，繼續(xù)培養(yǎng)一定時間后，收集細胞，PBS清洗2次。3、加入Rhodamine123工作液重懸細胞，37℃避光孵育15min或更長時間。【注意】：由于細胞種類和實驗體系不同，Rhodamine123工作液濃度和孵育時間可以根據預實驗或參考文獻自行調整。4、用流式細胞儀檢測。

四、實驗案例1、取對數生長期A549細胞接于六孔板（1*106+2mlDMEM培養(yǎng)基）,37℃培養(yǎng)箱培養(yǎng)4-24h待其貼壁，以便后續(xù)實驗操作.2、棄掉培養(yǎng)液，PBS洗滌兩次.3、用培養(yǎng)基（無血清）稀釋Rh123母液制備1～20μMRh123工作液。具體工作濃度取決于細胞類型和細胞濃度。4、將Rh123工作液加入六孔板并在37℃下孵育30分鐘.5、去除Rh123工作液并用PBS洗滌三次細胞去除背景色.6、熒光顯微鏡觀察. 江西熒光染料水溶目前常用標記蛋白/抗體的熒光素主要有BODIPY類、香豆素類、羅丹明類、近紅外類、NBD胺類以及菁染料等。

選擇熒光染料時要考慮那些因素：激發(fā)波長處的消光系數應盡可能高：消光系數是衡量可以吸收多少光子的量度。量子產率應該盡可能高：這是吸收光子與發(fā)射光子的比率。消光系數和量子產率的乘積就是亮度。熒光染料應該是光穩(wěn)定的：遺憾的是，比較不同公司染料的光穩(wěn)定性的研究并不多。光致變色行為：對于STORM實驗，您需要一個閃爍的熒光團。但是，對于分子跟蹤實驗，您***不想要閃爍的熒光團?；?死細胞滲透性。您想要的反應側基（例如HaloTag、抗體等）。當您使用多個熒光探針時，尤其是當您量化共定位時，請謹慎處理其他顏色通道中的滲色。單獨測試所有熒光探針以評估滲透。

與花青和羅丹明染料一樣，熒光素也是一種有機染料。熒光素的比較大吸收波長為494nm，比較大發(fā)射波長為521nm（通常吸收藍色范圍內的光并發(fā)射綠色范圍內的光），熒光素是一種高熒光物質。即使在非常少量的情況下也可以檢測到它，并且在與抗體結合時用于顯微鏡檢查。熒光素的衍生物包括異硫氰酸熒光素、俄勒岡綠和羧基萘并熒光素等。與許多其他熒光染料一樣，熒光素價格低廉且易于使用，使其成為生物學研究中很受歡迎的染料之一。與大多數其他染料不同，熒光素在水溶液中是無毒的。因此，它是極少數用作地下水示蹤劑的染料之一。CY5熒光染料是一種被廣泛應用于生物分子檢測和熒光成像等領域的高效、穩(wěn)定的熒光標記試劑。

羅丹明屬于呫噸族。與市場上的許多其他染料相比，羅丹明具有出色的光穩(wěn)定性以及許多光物理特性，使其非常適合用作激光染料、熒光探針和顏料。它們在聚合物納米粒子表面的表征、聚合物-生物偶聯物的檢測、活細胞的成像以及寡核苷酸在膠乳上的吸附分析等方面特別有用。羅丹明熒光染料的衍生物也用作：分子開關，病毒表面修飾，化學傳感器，硫醇。不同類型的染料通過它們各自的取代基（R1、R2、R3、R4和G）來區(qū)分。由于它們的差異，這些熒光染料在溶液中也表現出不同的光物理特性（例如不同的熒光壽命和發(fā)射比較大值）。氨基被剛性化的羅丹明染料無論溫度范圍如何都表現出高量子產率，而在每個氮處具有兩個烷基取代基的那些表現出活化的內部轉化，量子產率和熒光壽命隨溫度的變化而變化。羅丹明101和羅丹明B是一些**常用的羅丹明染料具有以下特點：--羧基傾向于在酸性溶液中質子化--染料轉化為兩性離子堿性溶液--兩性離子染料在極性較小的有機溶劑中變?yōu)闊o色內酯要將羅丹明用作熒光探針，必須對其進行修改。這可以通過(thexanthenemoiety)氨基、羧基苯基環(huán)或羧酸基團的修飾來實現。與TRITC一樣，羅丹明(NHS-rhodamine)的熒光特性為544nm（比較大吸收波長）和576nm（比較大發(fā)射）。PI是一種可對DNA染色的細胞核染色試劑，它在嵌入雙鏈DNA后釋放紅色熒光。武漢熒光染料APC

生物發(fā)光是利用熒光素酶報告基因在體內表達產生的熒光蛋白與體外注射的熒光素底物發(fā)生化學反映產生熒光。武漢熒光染料APC

DiD，DiO，DiI，DiR和DiS染料是一族親脂性的熒光染料，可以用來染細胞膜和其它脂溶性生物結構。當與細胞膜結合后其熒光強度**增強，這類染料有著很高的淬滅常數和激發(fā)態(tài)壽命。一旦對細胞染色，這類染料在整個細胞膜上擴散，比較好濃度時可以使整個細胞膜染色。它們的熒光顏**分明顯：DiI（橙色熒光），DiO（綠色熒光），DiD（紅色熒光）和 DiR （深紅色熒光）這使得他們可以用來對活細胞進行多色成像和流式分析。DiI和DiO可以分別用標準的 FITC和TRITC的濾光片。DiD可以用 633 nm He–Ne 激光器激發(fā)，有著比DiI更長的激發(fā)波長和發(fā)射波長，在細胞和組織染色中更有價值。 DiR的紅外熒光可以穿透細胞和組織，在***成像中用來示蹤。武漢熒光染料APC