上海長沙熒光染料

三、流式細胞儀分析1、取對數(shù)生長期的細胞，接種到孔板，過夜培養(yǎng)。2、如果要進行藥物刺激，在細胞中加入感興趣的藥物進行干預，繼續(xù)培養(yǎng)一定時間后，收集細胞，PBS清洗2次。3、加入Rhodamine123工作液重懸細胞，37℃避光孵育15min或更長時間?！咀⒁狻浚河捎诩毎N類和實驗體系不同，Rhodamine123工作液濃度和孵育時間可以根據(jù)預實驗或參考文獻自行調(diào)整。4、用流式細胞儀檢測。

四、實驗案例1、取對數(shù)生長期A549細胞接于六孔板（1*106+2mlDMEM培養(yǎng)基）,37℃培養(yǎng)箱培養(yǎng)4-24h待其貼壁，以便后續(xù)實驗操作.2、棄掉培養(yǎng)液，PBS洗滌兩次.3、用培養(yǎng)基（無血清）稀釋Rh123母液制備1～20μMRh123工作液。具體工作濃度取決于細胞類型和細胞濃度。4、將Rh123工作液加入六孔板并在37℃下孵育30分鐘.5、去除Rh123工作液并用PBS洗滌三次細胞去除背景色.6、熒光顯微鏡觀察. DAPI染色液（DAPI Staining Solution）常用于細胞核染色，可將細胞核染成藍色。上海長沙熒光染料

一、體外生物發(fā)光試驗熒光素試劑的制備：D-熒光素，鉀鹽，無菌純水，完全培養(yǎng)基（自行配置）1、用無菌水制備100X熒光素原液（15mg/ml），輕輕顛倒搖動至熒光素完全溶解?；靹蚝罅⒓词褂没蚍盅b后-20℃凍存。2、將D-luciferin，potassiumsalt溶解于預熱好的組織培養(yǎng)基中制備成濃度為150μg/ml的工作液。用組織培養(yǎng)基1∶100稀釋儲存液，配置工作液(終濃度150μg/mL)3、去除培養(yǎng)細胞的培養(yǎng)基圖像分析前，向細胞培養(yǎng)板中添加1×熒光素工作液，然后進行圖像分析-注射器濾膜過濾除菌，0.2μm注：成像前在37℃下對細胞進行短時間孵育可增強信號。上海長沙熒光染料羅丹明具有出色的光穩(wěn)定性以及許多光物理特性，使其非常適合用作激光染料、熒光探針和顏料。

SUPERGreenI（10,000×DMSO溶液，電泳級）儲存條件及注意事項4℃避光可保存12個月。本品用DMSO溶解，因DMSO的熔點是18.5℃，使用前請放置到室溫充分溶解。SUPERGreenI核酸染料特點●無毒性：屬花菁類染料，容易生物降解，無致*毒性?！耢`敏度高：至少可檢出20pgDNA，高于EB染色法25～100倍?！裥旁氡雀撸簶悠窡晒庑盘枏?，背景信號低?！癫僮骱唵危簾o須脫色或沖洗，即可直接用紫外凝膠透射儀或可見光透射儀觀察?！襁m用范圍廣：可適用于多種凝膠電泳方法：瓊脂糖凝膠、聚丙烯酰胺凝膠電泳、脈沖電場凝膠電泳和毛細管電泳等?！袷褂梅奖悖簩Ψ肿由飳W中常用的酶（如：Taq酶、反轉(zhuǎn)錄酶、內(nèi)切酶、T4連接酶等）沒有抑制作用。●經(jīng)濟：價格比銀染便宜。

CY5熒光染料是一種被廣泛應用于生物分子檢測和熒光成像等領域的高效、穩(wěn)定的熒光標記試劑。它具有出色的熒光性能和良好的生物相容性。Cy5屬于小分子染料，其*大發(fā)射波長為670nm，其標記的抗體適用于所有配備633nm氬離子激光器的流式細胞儀，檢測通道一般是FL4通道。除流式細胞術外，Cy5同樣適用于傳統(tǒng)的熒光顯微鏡技術。需注意的是，Cy5與單核細胞和粒細胞的非特異性結(jié)合多，實驗結(jié)果容易出現(xiàn)假陽性。Cy5.5含有一個游離胺基,可與多種官能團共軛,包括NHS酯和環(huán)氧化合物。激發(fā)和發(fā)射的最大值分別為678nm和694nm。Cy5.5已應用于各種基于熒光的實驗中。Cy5.5是一種遠紅色(和近紅外)發(fā)射染料,是熒光測量的理想選擇。Cy5.5具有成本效益,且其標記化學操作簡單,適合于潛在的***藥物開發(fā)Cy5.5標記因子VIIa是用來想象**的。用這些靶向蛋白標記的Cy5.5在**異種移植物上特異定位至少14天,但未結(jié)合的Cy5.5不能定位于任何異種移植或***。這種**血管內(nèi)皮細胞中抗組織因子的成像方法可用于檢測原發(fā)性**和轉(zhuǎn)移以及監(jiān)測體內(nèi)***反應[1]。pH/溫度敏感磁性納米凝膠結(jié)合Cy5.5標記乳鐵蛋白(Cy5.5-Lf-MPNA納米凝膠)是一種有前途的膠質(zhì)瘤術前MRI和術中熒光成像的對比劑[2]吲哚菁綠在生物識別和藥物輸送方面也有廣泛的應用。

過標記——計算結(jié)果顯示每摩爾145,000MW的蛋白標記的熒光團大于10mol。雖然過標記的蛋白也可以使用，但可能會引起蛋白的聚集、降低抗體結(jié)合抗原的特異性，這些都會造成非特異性結(jié)合。過標記還會引起熒光淬滅。可以增加蛋白或減少反應時間。3．未結(jié)合染料難以去除——盡管大部分時候用分離柱可以較好的純化蛋白偶聯(lián)物，但仍可能會有痕量的游離染料留在偶聯(lián)物溶液中，會使標記計算的值偏高。可用分離柱再次分離或透析去除。4．蛋白或蛋白偶聯(lián)物無法洗脫——不要再加緩沖液，只需再次離心一次或幾次。DiD、DiR、DiO和DiI染料是最常見的細胞膜染料，它們是一族親脂性的熒光染料，用于細胞的形態(tài)學和結(jié)構研究。江西供應熒光染料

熒光素衍生物具有高吸收率優(yōu)異的熒光量子產(chǎn)率和良好的水溶性是流式細胞儀和免疫熒光中常用的熒光標記之一。上海長沙熒光染料

DiD，DiO，DiI，DiR和DiS染料是一族親脂性的熒光染料，可以用來染細胞膜和其它脂溶性生物結(jié)構。當與細胞膜結(jié)合后其熒光強度**增強，這類染料有著很高的淬滅常數(shù)和激發(fā)態(tài)壽命。一旦對細胞染色，這類染料在整個細胞膜上擴散，比較好濃度時可以使整個細胞膜染色。它們的熒光顏**分明顯：DiI（橙色熒光），DiO（綠色熒光），DiD（紅色熒光）和 DiR （深紅色熒光）這使得他們可以用來對活細胞進行多色成像和流式分析。DiI和DiO可以分別用標準的 FITC和TRITC的濾光片。DiD可以用 633 nm He–Ne 激光器激發(fā)，有著比DiI更長的激發(fā)波長和發(fā)射波長，在細胞和組織染色中更有價值。 DiR的紅外熒光可以穿透細胞和組織，在***成像中用來示蹤。上海長沙熒光染料