河北熒光染料DAPI

一種發(fā)光雜環(huán)化合物，存在于生物發(fā)光的生物體中，如螢火蟲。在含有三磷酸腺苷的情況下，通過熒光素酶氧化脫羧產(chǎn)生光?？捎糜跓晒馑孛干锇l(fā)光成像和細胞高通量篩選應用。D-熒光素（D-Luciferin）是螢火熒光素酶底物，其量子效率為0.88，是Luminol的20倍。反應原理：首先，在鎂離子存在下熒光素酶使熒光素與ATP反應，接著它被氧化形成二氧雜環(huán)丁烷結構并發(fā)出黃綠色的光。Luciferin-luciferase發(fā)光用于ATP監(jiān)控以測定細胞活力以及細菌計數(shù)。它還用于報告基因檢測?？膳c小動物***成像系統(tǒng)配套使用，用于標記LUC基因后的體內***熒光檢測。D-熒光素游離酸（D-Luciferin,freeacid）、D-熒光素鉀鹽（D-Luciferin,potassiumsalt）和D-熒光素鈉鹽（D-Luciferin,sodiumsalt），鉀鹽、鈉鹽的形式是**通用的，因為它們都易溶于水。鉀鹽也是***動物檢測使用的主要形式。它們的激發(fā)和發(fā)射波長分別為328nm和533nm。Super Fluor活化酯（與Invitrogen的Alexa Fluor活化酯完全相同）。河北熒光染料DAPI

細胞培養(yǎng)后，需要對其生長情況、形態(tài)甚至生物學性狀進行觀察。由于細胞小而復雜，若不借助適當?shù)氖侄?，難以觀察其形態(tài)、結構，更難發(fā)現(xiàn)細胞內各種組分的分子組成及功能。目前，已有多種研究細胞的技術，從光學顯微鏡到電子顯微鏡，從一般細胞化學法到免疫化學法。細胞染色是研究細胞生物學特征的一種常用手段，然而，對于細胞實驗新手來說，想要獲得一張漂亮的細胞染色圖并不容易。染色試劑不會選、細胞染色不均勻、染色時切片脫落等都是很常見的問題。

細胞膜常用染料DiD、DiR、DiO和DiI染料是最常見的細胞膜染料（見表2），它們是一族親脂性的熒光染料，用于細胞的形態(tài)學和結構研究。該系列染料進入細胞膜后，會在整個細胞膜上側向擴散，在比較好濃度時可以使整個細胞膜染色。其中DiD染料的染色效率高，染色均一，熒光不易猝滅，無明顯細胞毒性，且受自身熒光背景干擾小。目前DiD已成功應用于多種細胞的體內示蹤研究，如Treg細胞、間充質干細胞、腫瘤細胞、造血干祖細胞等。 長沙熒光染料DIR異硫氰酸熒光素(FITC) 是一種有機熒光染料，目前，這種熒光染料仍用于免疫熒光和流式細胞術中。

Hoechst33342是一種可透過細胞膜并對DNA染色的細胞核染色試劑，它在嵌入雙鏈DNA后釋放強烈的藍色熒光。Hoechst33342常用于細胞凋亡檢測，染色后用熒光顯微鏡觀察或流式細胞儀檢測。Hoechst33342-DNA的激發(fā)和發(fā)射波長分別為350nm和460nm?？扇苡谒?。4.染色程序：（1）用PBS或合適的緩沖液制備10～50μMHoechst33342染料。（2）將1/10細胞培養(yǎng)基體積的Hoechst染料溶液加入細胞培養(yǎng)物中（可以用1/10濃度的Hoechst染料緩沖液代替培養(yǎng)基）。（3）在37℃培養(yǎng)細胞10～20分鐘。（4）用PBS或合適的緩沖液洗細胞兩次。（5）用帶有350nm激發(fā)波長，460nm發(fā)射波長的濾光片的熒光顯微鏡觀察細胞。

除了以上應用，吲哚菁綠還可以用于生物識別和藥物輸送。在生物識別中，吲哚菁綠可以與特定的生物分子結合，從而實現(xiàn)對這些分子的檢測和定量分析。這項技術在生物醫(yī)學研究和臨床診斷中有著廣泛的應用前景。此外，吲哚菁綠還可以作為藥物輸送系統(tǒng)的一部分，將藥物包裹在其分子結構中，通過近紅外光***釋放藥物，實現(xiàn)靶向***。吲哚菁綠作為一種多功能的熒光染料，在醫(yī)學和生物領域具有廣泛的應用前景。其綠色溶解度的優(yōu)良性能，使其能夠在水溶液中快速溶解，為其在醫(yī)學影像學、光熱***、生物識別和藥物輸送等方面的應用奠定了基礎。隨著科學技術的不斷進步，相信吲哚菁綠在未來將發(fā)揮更大的潛力，為人類健康事業(yè)做出更大的貢獻。吲哚菁綠作為一種熒光染料，在醫(yī)學影像學中的應用是**為突出的。它可以通過靜脈注射進入人體血液循環(huán)系統(tǒng)，并在近紅外激光的照射下發(fā)出熒光信號。這種熒光信號可以被**的顯像設備捕獲和記錄，從而形成高分辨率、高對比度的影像。這樣的影像可以幫助醫(yī)生觀察和分析血管、淋巴系統(tǒng)以及**等病變的情況，提供重要的診斷依據(jù)。動物體內光學成像主要采用生物發(fā)光與熒光發(fā)光兩種技術。

熒光染料，由于靈敏度高，操作方便，逐漸取代了放射性同位素作為檢測標記，其廣泛應用于熒光免疫，熒光探針，細胞染色等。包括特異性的DNA染色，用于染色體分析、細胞周期、細胞凋亡等相關研究。另有很多核酸染料在多色染色系統(tǒng)中是非常有用的復染劑，可作為背景對照，標記細胞核使細胞內結構的空間關系一目了然。熒光標記的單克隆抗體技術為流式細胞儀在研究細胞膜和細胞內各種功能性抗原、**基因蛋白等領域擴展了無限的應用空間。熒光探針可以通過蛋白質交聯(lián)劑共價結合在單克隆抗體上。免疫熒光標記**常用的染料有異硫氰酸熒光素(fluoresceinisothiocyanate,FITC)、藻紅蛋白(PE)以及AlexaFluor系列染料等。核酸熒光染料對細胞核染色后定量測量細胞所發(fā)出的熒光強度，就可以確定細胞核中DNA、RNA的含量，并可以對細胞周期和細胞的增殖狀況進行分析。有多種熒光染料可以對細胞中的DNA或RNA染色，常用的DNA染料包括碘化丙啶(PI)、DAPI、Hoechst33342等，RNA染料有噻唑橙、吖啶橙等。染料DiI, DiO, DiD 和 DiR是一類親脂性熒光染料家族，用于標記細胞膜和疏水性組織。安徽熒光染料標記

PI常用于細胞凋亡(apoptosis)或細胞壞死(necrosis)的檢測，常用于流式細胞儀分析。河北熒光染料DAPI

三、流式細胞儀分析1、取對數(shù)生長期的細胞，接種到孔板，過夜培養(yǎng)。2、如果要進行藥物刺激，在細胞中加入感興趣的藥物進行干預，繼續(xù)培養(yǎng)一定時間后，收集細胞，PBS清洗2次。3、加入Rhodamine123工作液重懸細胞，37℃避光孵育15min或更長時間?！咀⒁狻浚河捎诩毎N類和實驗體系不同，Rhodamine123工作液濃度和孵育時間可以根據(jù)預實驗或參考文獻自行調整。4、用流式細胞儀檢測。

四、實驗案例1、取對數(shù)生長期A549細胞接于六孔板（1*106+2mlDMEM培養(yǎng)基）,37℃培養(yǎng)箱培養(yǎng)4-24h待其貼壁，以便后續(xù)實驗操作.2、棄掉培養(yǎng)液，PBS洗滌兩次.3、用培養(yǎng)基（無血清）稀釋Rh123母液制備1～20μMRh123工作液。具體工作濃度取決于細胞類型和細胞濃度。4、將Rh123工作液加入六孔板并在37℃下孵育30分鐘.5、去除Rh123工作液并用PBS洗滌三次細胞去除背景色.6、熒光顯微鏡觀察. 河北熒光染料DAPI