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熒光染料,由于靈敏度高,操作方便,逐漸取代了放射性同位素作為檢測標(biāo)記,其廣泛應(yīng)用于熒光免疫,熒光探針,細(xì)胞染色等。包括特異性的DNA染色,用于染色體分析、細(xì)胞周期、細(xì)胞凋亡等相關(guān)研究。另有很多核酸染料在多色染色系統(tǒng)中是非常有用的復(fù)染劑,可作為背景對照,標(biāo)記細(xì)胞核使細(xì)胞內(nèi)結(jié)構(gòu)的空間關(guān)系一目了然。熒光標(biāo)記的單克隆抗體技術(shù)為流式細(xì)胞儀在研究細(xì)胞膜和細(xì)胞內(nèi)各種功能性抗原、**基因蛋白等領(lǐng)域擴(kuò)展了無限的應(yīng)用空間。熒光探針可以通過蛋白質(zhì)交聯(lián)劑共價(jià)結(jié)合在單克隆抗體上。免疫熒光標(biāo)記**常用的染料有異硫氰酸熒光素(fluoresceinisothiocyanate,FITC)、藻紅蛋白(PE)以及AlexaFluor系列染料等。核酸熒光染料對細(xì)胞核染色后定量測量細(xì)胞所發(fā)出的熒光強(qiáng)度,就可以確定細(xì)胞核中DNA、RNA的含量,并可以對細(xì)胞周期和細(xì)胞的增殖狀況進(jìn)行分析。有多種熒光染料可以對細(xì)胞中的DNA或RNA染色,常用的DNA染料包括碘化丙啶(PI)、DAPI、Hoechst33342等,RNA染料有噻唑橙、吖啶橙等。D-熒光素鉀鹽小動(dòng)物成像。山東光敏劑熒光染料
1.DiD,DiO,DiI,DiR和DiS細(xì)胞膜染色液制備(1)配置DMSO或EtOH儲存液:儲存液用DMSO或EtOH配置濃度1~5mM。注意:未使用的儲存液保存在-20°C,避免反復(fù)凍融。(2)工作液制備:用合適的緩沖液(如:無血清培養(yǎng)基,HBSS或PBS)稀釋儲存液,配制濃度為1~5μM的工作液。注意:工作液的**終濃度是根據(jù)不同細(xì)胞和實(shí)驗(yàn)的經(jīng)驗(yàn)來配制??梢詮耐扑]濃度的十倍以上尋找比較好條件。
2.懸浮細(xì)胞染色(1)懸浮細(xì)胞密度為1×106/mL加入到工作液中。(2)在37℃培養(yǎng)細(xì)胞2~20分鐘,不同的細(xì)胞比較好培養(yǎng)時(shí)間不同。(3)染色細(xì)胞試管在1000~1500轉(zhuǎn)離心5分鐘。(4)傾倒上清液,再次緩慢加入預(yù)溫37℃的培養(yǎng)液。(5)重復(fù)(3),(4)步驟兩次以上。 廈門熒光染料流式細(xì)胞CY7 是一種 CY 染料。CY 為花菁 (Cyanine) 的縮寫,是由奇數(shù)個(gè)甲基單元連接的兩個(gè)氮原子組成的化合物。
管可用于實(shí)驗(yàn)室的熒光團(tuán)數(shù)量眾多,但這些染料通常屬于以下三組之一:熒光染料:這些是用于在體外標(biāo)記生物相關(guān)分子的小型有機(jī)天然或合成熒光分子。該組中的一些熒光染料包括熒光素、溴化乙錠和花青。熒光蛋白:這些是較大的、生物制造的蛋白質(zhì),由于它們的大分子結(jié)構(gòu)而發(fā)出熒光。GFP、RFP和YFP是屬于該組的一些染料。量子點(diǎn):這些高熒光合成納米晶體由半導(dǎo)體材料制成。隨著熒光基本特性的廣泛應(yīng)用和該領(lǐng)域的顯著進(jìn)步,已經(jīng)針對特定應(yīng)用和儀器開發(fā)和優(yōu)化了數(shù)百種活性熒光染料。同樣,多年來,大量復(fù)雜的熒光技術(shù)(例如,F(xiàn)RET、TRF、FP、FRAP、FACS、FCS)也在不斷發(fā)展。
Cy3 (Cyanine 3) 是一種發(fā)橘黃色熒光的花青素?zé)晒馊玖?。Cy3染料的激發(fā)峰和發(fā)射峰分別在550 nm和570 nm左右,它的熒光肉眼觀察很明亮,并且對pH不敏感,在共聚焦顯微鏡中可以用532nm(肩峰)或者556nm(頂峰)的激光束激發(fā),在普通熒光顯微鏡中可以用 TRITC (tetramethylrhodamine) 的濾片觀察,所以在絕大部分熒光儀器上都可以使用。Cy3也是Dil等細(xì)胞電位追蹤劑的母核,所以它是在生物技術(shù)中非常有用的熒光染料。在熒光成像時(shí),Cy3的背景熒光一般認(rèn)為比TAMRA等TRITC系列的染料低。 Cy3可以用來標(biāo)記蛋白,抗體,多肽等,它常見的使用是標(biāo)記核酸分子(DNA和RNA)?;跓晒鈭D譜的相似性,Cy3可以被TAMRA,TRITC, BODIPY TMR等染料替代,在需要更明亮,更穩(wěn)定的替代物時(shí),可以考慮使用AF547或者AF555等。Cy3 (Cyanine 3) 是一種發(fā)橘黃色熒光的花青素?zé)晒馊玖稀?/p>
InvitrogenCy3染料是一種明亮的橙色熒光染料,可使用532nm激光線激發(fā),并使用TRITC(四甲基羅丹明)濾光片組進(jìn)行可視化。除了免疫細(xì)胞化學(xué)應(yīng)用,Cy3染料通常用于標(biāo)記核酸。發(fā)光說明:Cy3熒光團(tuán)也是親脂性神經(jīng)元和長期DiI細(xì)胞追蹤試劑的基礎(chǔ),該試劑添加烷基尾(≥12個(gè)碳)添加到**熒光團(tuán)上。Cy3染料是用于成像、流式細(xì)胞術(shù)和基因組應(yīng)用的蛋白質(zhì)和核酸結(jié)合物的傳統(tǒng)橙色熒光標(biāo)簽。它也是經(jīng)典親脂性示蹤劑DiI及其變體的基礎(chǔ)。根據(jù)化學(xué)結(jié)構(gòu),Cy3可分為普通Cy3(常簡稱Cy3)和磺化Cy3(Sulfo-Cy3)。Cy3水溶性較低,在水相標(biāo)記反應(yīng)時(shí)常常需要使用有機(jī)共溶劑,常用有機(jī)溶劑包括DMF,DMSO和乙腈等?;腔疌y3是在Cy3的結(jié)構(gòu)基礎(chǔ)上磺化的產(chǎn)物,附帶2個(gè)或3個(gè)磺酸根離子。由于磺化效應(yīng),磺化Cy3的亮度比Cy3稍亮,熒光穩(wěn)定性也提高,可賴受更長時(shí)間的曝光?;腔疌y3水溶性極高,所以在標(biāo)記反應(yīng)中不需要使用有機(jī)共溶劑,特別適合標(biāo)記蛋白等對有機(jī)溶劑敏感的生物分子。另外磺化Cy3水溶性極好,并且染料分子本身帶電荷,標(biāo)記到蛋白表面后不會引發(fā)疏水性蛋白聚集,提高熒光標(biāo)記產(chǎn)物的穩(wěn)定性。當(dāng)然,磺化Cy3-NHS也可溶于甲醇,DMSO,DMF等有機(jī)溶劑,標(biāo)記反應(yīng)也可以在純有機(jī)溶劑中進(jìn)行。Super Flour 系列熒光探針,具有更強(qiáng)的熒光強(qiáng)度,更廣的pH應(yīng)用范圍(pH 4~10), 更好的抗淬滅性。江蘇熒光染料
D-熒光素鉀鹽是熒光素酶的水溶性底物,存在于多種發(fā)光生物體中。山東光敏劑熒光染料
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多肽、蛋白、抗體標(biāo)記:5(6)-FAM5(6)-FAM5-FAM6-FAM5(6)-FAM,SE5-FAM,SE6-FAM,SE5(6)-TAMRA5-TAMRA6-TAMRA5(6)-TAMRA,SE5-TAMRA,SE6-TAMRA,SE5-ROX6-ROX5-ROX,SE6-ROX,SE***成像:脂溶性熒光染料CY3NHSesterCY3amineCY3maleimideCY3azideCY3COOHCY3alkyneCY3hydrazideCY3ThiolCY5amineCY5NHSesterCY5maleimideCY5azideCY5COOHCY5alkyneCY5hydrazideCY5ThiolCY7amineCY7maleimideCY7azideCY7COOHCY7alkyneCY7hydrazideCY7Thiol水溶性熒光染料Sulfo-Cyanine3NHSesterSulfo-Cyanine3amineSulfo-CY3azideSulfo-CY3carboxylicacidSulfo-CY3alkyneSulfo-CY3hydrazideSulfo-CY3ThiolSulfo-Cyanine5NHSesterSulfo-Cyanine5amineSulfo-CY5azideSulfo-CY5carboxylicacidSulfo-CY5alkyneSulfo-CY5hydrazideSulfo-CY5ThiolCY7NHSesterSulfo-Cyanine7NHSesterSulfo-Cyanine7amineSulfo-CY7azideSulfo-CY7carboxylicacidSulfo-CY7alkyneSulfo-CY7hydrazideSulfo-CY7Thiol近紅外I區(qū)/II區(qū)熒光染料ICG-NHSesterICG-amineICG-maleimideICG-azideICG-COOHICG-alkyneICG-hydrazideICG-ThiolICG-TzICG-DBCO 山東光敏劑熒光染料