天津西安轉(zhuǎn)染試劑

    考慮RNA需求較少的RNA需求可以降低實(shí)驗(yàn)成本，同時(shí)也可以減少對(duì)細(xì)胞的潛在毒性。比較不同試劑的RNA用量：不同的轉(zhuǎn)染試劑可能需要不同量的RNA才能達(dá)到相同的轉(zhuǎn)染效果。在選擇比較好的RNA轉(zhuǎn)染試劑并將其與電穿孔法進(jìn)行病毒RNA的比較的研究中，某些商業(yè)轉(zhuǎn)染試劑在適當(dāng)優(yōu)化后，細(xì)胞死亡少得多，RNA需求少，轉(zhuǎn)染效率提高3?？紤]實(shí)驗(yàn)規(guī)模：如果實(shí)驗(yàn)需要大量轉(zhuǎn)染細(xì)胞，那么選擇RNA需求較少的試劑可以降低成本。例如，在大規(guī)模的細(xì)胞培養(yǎng)實(shí)驗(yàn)中，選擇RNA需求少的轉(zhuǎn)染試劑可以節(jié)省成本和資源。四、考慮血清兼容性在有血清的情況下能夠遞送RNA的轉(zhuǎn)染試劑可以簡(jiǎn)化實(shí)驗(yàn)操作，提高實(shí)驗(yàn)的可重復(fù)性。血清對(duì)轉(zhuǎn)染的影響：一些轉(zhuǎn)染試劑在有血清的情況下可能會(huì)降低轉(zhuǎn)染效率，而另一些試劑則可以在血清存在的情況下正常工作。在比較不同商業(yè)RNA轉(zhuǎn)染試劑將黃熱病病毒（YFV）和丙型肝炎病毒（HCV）RNA復(fù)制子遞送至Huh7細(xì)胞的能力的研究中，討論了與高效轉(zhuǎn)染相關(guān)的因素，以及在存在血清的情況下能夠遞送RNA的優(yōu)勢(shì)3。選擇血清兼容的試劑：如果實(shí)驗(yàn)需要在有血清的條件下進(jìn)行，那么選擇血清兼容的轉(zhuǎn)染試劑是必要的。例如，在一些細(xì)胞培養(yǎng)實(shí)驗(yàn)中，血清是細(xì)胞生長(zhǎng)所必需的。 在轉(zhuǎn)染實(shí)驗(yàn)中使用對(duì)照對(duì)于確定所使用的轉(zhuǎn)染試劑和核酸的效果和效率至關(guān)重要。天津西安轉(zhuǎn)染試劑

二、影響因素的差異細(xì)胞接種密度：不同類型的細(xì)胞在比較好轉(zhuǎn)染效率下的細(xì)胞接種密度不同。例如，宮頸*細(xì)胞Hela和Siha的比較好接種密度為每24孔板的每孔1.5×10?個(gè)細(xì)胞1，而研究中Caco-2細(xì)胞的比較好接種密度為2×10?9。DNA用量：各種細(xì)胞所需的DNA用量也存在差異。如PC12細(xì)胞轉(zhuǎn)染的比較好DNA用量為2μg3，而Caco-2細(xì)胞轉(zhuǎn)染時(shí)比較好DNA用量為4μg9。脂質(zhì)體與DNA的比例：不同細(xì)胞類型對(duì)應(yīng)的比較好脂質(zhì)體與DNA的比例不同。Hela細(xì)胞中miRNA與脂質(zhì)體比例為1:0.5，Siha細(xì)胞中為1:0.71；Caco-2細(xì)胞轉(zhuǎn)染時(shí)比較好脂質(zhì)體與DNA比例為2.5:19。復(fù)合物形成時(shí)間和孵育時(shí)間：不同細(xì)胞類型對(duì)脂質(zhì)體-DNA復(fù)合物的形成時(shí)間和細(xì)胞與復(fù)合物的孵育時(shí)間要求不同。例如，Hela和Siha細(xì)胞未明確提及復(fù)合物形成時(shí)間和孵育時(shí)間，而Caco-2細(xì)胞的比較好脂質(zhì)體-DNA復(fù)合物形成時(shí)間為30min，細(xì)胞與復(fù)合物孵育時(shí)間為6h9。內(nèi)蒙古體內(nèi)轉(zhuǎn)染試劑在選擇合適的小RNA分子進(jìn)行轉(zhuǎn)染相關(guān)功能分析之前，應(yīng)先確定其實(shí)驗(yàn)需要。

優(yōu)化電轉(zhuǎn)方法篩選**適電壓和脈沖時(shí)間：不同細(xì)胞種類電轉(zhuǎn)所需的**適電壓和脈沖時(shí)間不同。例如，人成纖維細(xì)胞電轉(zhuǎn)modRNA的**適電壓為440V，**適脈沖時(shí)間為30ms；Hela、293T、3T3細(xì)胞電轉(zhuǎn)**適電壓分別為425V、400V、440V，**適脈沖時(shí)間均為30ms；人/兔外周血來源的懸浮的單個(gè)核細(xì)胞的**適電壓分別為840V和860V，**適脈沖時(shí)間均為20ms。通過篩選**適電壓和脈沖時(shí)間，可以提高RNA轉(zhuǎn)染效率，同時(shí)證明了電轉(zhuǎn)法轉(zhuǎn)染modRNA進(jìn)入細(xì)胞的可行性，且可同時(shí)將兩種modRNA導(dǎo)入同一個(gè)細(xì)胞內(nèi)6。RNA電穿孔高效轉(zhuǎn)染原代淋巴細(xì)胞：使用體外轉(zhuǎn)錄的mRNA通過電穿孔可以實(shí)現(xiàn)高基因轉(zhuǎn)染效率和低轉(zhuǎn)染相關(guān)毒性。例如，在用GFP或mCD62L轉(zhuǎn)染的受激原代人和鼠T淋巴細(xì)胞中觀察到90％以上的轉(zhuǎn)基因表達(dá)和80％以上的活細(xì)胞。GFPRNA對(duì)未刺激的人PBMC或鼠脾細(xì)胞進(jìn)行電穿孔，分別產(chǎn)生95％和56％的GFP?細(xì)胞。此外，基因表達(dá)迅速且持久，對(duì)經(jīng)過RNA電穿孔的T淋巴細(xì)胞未觀察到不良影響7。

RNA電穿孔高效轉(zhuǎn)染原代淋巴細(xì)胞：使用體外轉(zhuǎn)錄的mRNA通過電穿孔可以實(shí)現(xiàn)高基因轉(zhuǎn)染效率和低轉(zhuǎn)染相關(guān)毒性。例如，在用GFP或mCD62L轉(zhuǎn)染的受激原代人和鼠T淋巴細(xì)胞中觀察到90％以上的轉(zhuǎn)基因表達(dá)和80％以上的活細(xì)胞。GFPRNA對(duì)未刺激的人PBMC或鼠脾細(xì)胞進(jìn)行電穿孔，分別產(chǎn)生95％和56％的GFP?細(xì)胞。此外，基因表達(dá)迅速且持久，對(duì)經(jīng)過RNA電穿孔的T淋巴細(xì)胞未觀察到不良影響7。五、優(yōu)化共轉(zhuǎn)染方法整合共轉(zhuǎn)染和平行共轉(zhuǎn)染：研究不同的共轉(zhuǎn)染和連續(xù)轉(zhuǎn)染方法，特別是體外轉(zhuǎn)錄信使RNA（IVTmRNA）。對(duì)于在納米載體形成之前預(yù)混合的IVTmRNAs（整合共轉(zhuǎn)染）和同時(shí)用單獨(dú)形成的納米載體轉(zhuǎn)染細(xì)胞（平行共轉(zhuǎn)染），分析決定共轉(zhuǎn)染效率的定量參數(shù)。同時(shí)遞送siRNA和mRNA也表明整合方法的比較高共轉(zhuǎn)染效率，但由于兩個(gè)**運(yùn)營(yíng)實(shí)體的峰值輸出在動(dòng)力學(xué)上不同，連續(xù)交付的效率比較高。核酸與轉(zhuǎn)染試劑的比例對(duì)轉(zhuǎn)染效率也有影響。

對(duì)細(xì)胞活力的影響：一些研究表明，在陽離子脂質(zhì)體LipofectamineTM2000介導(dǎo)下雞TRPV6基因RNA干擾（RNAi）質(zhì)粒轉(zhuǎn)染入成骨細(xì)胞的實(shí)驗(yàn)中，當(dāng)轉(zhuǎn)染前細(xì)胞融合達(dá)到90％以上，質(zhì)粒DNA與脂質(zhì)體比例為1:2.5時(shí)轉(zhuǎn)染效率比較高，并且在轉(zhuǎn)染后48h轉(zhuǎn)染效果比較好，對(duì)細(xì)胞的毒性作用較小3。在人肝瘤兩種細(xì)胞模型中，通過比較LipofectamineRnaimax和Genmute轉(zhuǎn)染劑發(fā)現(xiàn)，用基因***的細(xì)胞呈現(xiàn)熒光陰性對(duì)照siRNA的更高攝取，并且觀察到與基因轉(zhuǎn)染的細(xì)胞相對(duì)于脂質(zhì)積rnaimax的細(xì)胞具有較高的活力6。有研究使用兩種常見的RNA干擾（RNAi）轉(zhuǎn)染試劑DharmaFECT1和INTERFERin，在模擬轉(zhuǎn)染中使用非靶向siRNAs，結(jié)果表明這些試劑會(huì)引起HeLa細(xì)胞脂質(zhì)組的變化，但功能影響仍有待研究，這也暗示在RNAi實(shí)驗(yàn)中使用適當(dāng)?shù)哪M轉(zhuǎn)染對(duì)照非常重要。

肌內(nèi)注射脂質(zhì)體不能引起強(qiáng)烈的毒性反應(yīng)，這與肺內(nèi)或靜脈注射途徑的情況不同。內(nèi)蒙古體內(nèi)轉(zhuǎn)染試劑

在大腸桿菌細(xì)胞中復(fù)制的質(zhì)粒通常含有二核苷酸頻率為1:16的CpG基序，這與細(xì)菌DNA中的頻率相似。天津西安轉(zhuǎn)染試劑

脂質(zhì)體轉(zhuǎn)染是一種常用的基因轉(zhuǎn)染方法，不同類型的細(xì)胞在脂質(zhì)體轉(zhuǎn)染過程中會(huì)表現(xiàn)出不同的特性和差異。以下是對(duì)脂質(zhì)體轉(zhuǎn)染對(duì)不同類型細(xì)胞影響差異的詳細(xì)分析：

一、轉(zhuǎn)染效率的差異宮頸*細(xì)胞：對(duì)于Hela細(xì)胞和Siha細(xì)胞，當(dāng)細(xì)胞接種密度為每24孔板的每孔1.5×10?個(gè)細(xì)胞，miRNA量為1μl，Hela細(xì)胞中miRNA與脂質(zhì)體比例為1:0.5，Siha細(xì)胞中為1:0.7時(shí)，24小時(shí)后可獲得比較高轉(zhuǎn)染效率1。與含血清的培養(yǎng)基相比，只有Siha細(xì)胞在無血清培養(yǎng)基中培養(yǎng)時(shí)，在轉(zhuǎn)染前能獲得更高的轉(zhuǎn)染效率（P＜0.01）1。PC12細(xì)胞：lipo2000轉(zhuǎn)染PC12細(xì)胞的比較好轉(zhuǎn)染條件為lipo2000用量為5μL，DNA2μg，轉(zhuǎn)染時(shí)間為6h，這種條件下的PC12細(xì)胞轉(zhuǎn)染率高達(dá)40%，且未影響細(xì)胞的正常分泌3。HepG2細(xì)胞：陽離子脂質(zhì)體的擴(kuò)散系數(shù)在lipoplex形成過程中與lipoplex的物理化學(xué)特性、lipoplex中質(zhì)粒DNA的可及性以及每代謝活性的基因表達(dá)對(duì)數(shù)密切相關(guān)2。隨著脂質(zhì)體尺寸的增加，主要的內(nèi)吞途徑從網(wǎng)格蛋白介導(dǎo)的內(nèi)吞轉(zhuǎn)變?yōu)橹そ閷?dǎo)的內(nèi)吞，此外，所有脂質(zhì)體尺寸均觀察到巨胞飲作用2。骨髓間充質(zhì)干細(xì)胞：脂質(zhì)體介導(dǎo)的CD基因在鼠骨髓間充質(zhì)干細(xì)胞中成功表達(dá)，于轉(zhuǎn)染48h后達(dá)峰值5。

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