胰蛋白酶的作用是使細(xì)胞間的蛋白質(zhì)水解從而使細(xì)胞離散。不同的組織或者細(xì)胞對胰酶的作用反應(yīng)不一樣胰酶分散細(xì)胞的活性還與其濃度、溫度和作用時間有關(guān),在pH為8.0、溫度為37°℃時,胰酶溶液的作用能力**強。使用胰酶時,應(yīng)把握好濃度、溫度和時間,以免消化過度造成細(xì)胞損傷。因Ca2+、Mg2+和血清、蛋白質(zhì)可降低胰酶的活性,所以配制胰酶溶液時應(yīng)選用不含Ca2+、Mg2+的BSS,如:D-Hanks液。終止消化時,可用含有血清培養(yǎng)液或者胰酶抑制劑終止胰酶對細(xì)胞的作用。胰蛋白酶是一種胰絲氨酸肽鏈內(nèi)切酶,作用于多肽鏈中賴氨酸和精氨酸殘基中的羧基側(cè)。河南EDTA胰酶采購
胰蛋白酶(Trypsin)簡稱胰酶,是一種絲氨酸水解酶,能把多肽鏈中賴氨酸和精氨酸殘基中的羧基端切斷。在組織細(xì)胞的提取、培養(yǎng),以及體外細(xì)胞培養(yǎng)過程中,均會使用到胰蛋白酶消化液,用于水解細(xì)胞間蛋白質(zhì),使組織或細(xì)胞離散成單個細(xì)胞。胰酶在37℃pH8.0條件下消化能力**強。常用胰酶工作濃度為0.25%。EDTA可以螯合鈣鎂離子,胰酶溶液中搭配EDTA使用可以加速細(xì)胞間連接蛋白的水解,起到增強消化的效果。酚紅是一種pH指示劑,溶液偏堿性時呈紫紅色,偏酸性時呈橘紅色,近中性時呈粉紅色。本產(chǎn)品為0.25%胰蛋白酶消化液,含0.25%胰蛋白酶,溶于Hank’s緩沖液,不含EDTA,無酚紅指示劑,經(jīng)0.22μm過濾除菌。河南EDTA胰酶采購消化同種細(xì)胞時含EDTA的胰酶消化時間會比不含EDTA時間短。
淡黃色的胰酶溶液能放心使用嗎?能,對于胰酶呈黃色的問題,不同品牌也都對此現(xiàn)象進(jìn)行了測試實驗。變色的胰酶同樣能很好的用于細(xì)胞的解離,請放心使用。細(xì)胞消化時,胰酶不去除對細(xì)胞的影響?細(xì)胞消化時,如果消化液中只有胰酶,不含EDTA,不去除是沒有問題的。如果消化液中含有胰酶和EDTA,比較好去除。EDTA是一種化學(xué)螯合劑,主要作用在于能螯合Ca、Mg離子,使細(xì)胞分離。但EDTA不能被血清中和,消化后要徹底清洗去除,否則細(xì)胞易脫壁。胰酶胰酶和EDTA聯(lián)合使用可提高消化效率,所以常二者合用。胰酶的保存
胰蛋白酶**點評胰蛋白酶能使痰、血凝塊溶化變稀,易于引流排痰,加速創(chuàng)面愈合凈化,促進(jìn)肉芽**增生,而不損傷正常**,臨床上有消消腫功能。[4]胰蛋白酶其他胰蛋白酶細(xì)胞培養(yǎng)胰蛋白酶的作用是使細(xì)胞間的蛋白質(zhì)水解從而使細(xì)胞離散。不同的**或者細(xì)胞對胰酶的作用反應(yīng)不一樣。胰酶分散細(xì)胞的活性還與其濃度、溫度和作用時間有關(guān),在pH為、溫度為37℃時,胰酶溶液的作用能力**強。使用胰酶時,應(yīng)把握好濃度、溫度和時間,以免消化過度造成細(xì)胞損傷。因Ca2+、Mg2+和血清、蛋白質(zhì)可降低胰酶的活性,所以配制胰酶溶液時應(yīng)選用不含Ca2+、Mg2+的BSS,如:D-Hanks液。終止消化時,可用含有血清培養(yǎng)液或者胰酶**劑終止胰酶對細(xì)胞的作用。1.稱取胰蛋白酶:按胰蛋白酶液濃度為%,用電子天平準(zhǔn)確稱取粉劑溶入小燒杯中的雙蒸水(若用雙蒸水需要調(diào)PH到左右)或PBS(D-hanks)液中。攪拌混勻,置于4℃內(nèi)過夜。2.用注射濾器抽濾消毒:配好的胰酶溶液要在超凈臺內(nèi)用注射濾器(微米微孔濾膜)抽濾**。3.分裝成小瓶于-20℃保存以備使用可!詞條圖冊更多圖冊參考資料1.胰蛋白酶.化學(xué)品數(shù)據(jù)庫[引用日期2017-05-26].***典**會,***典2010版[M],北京:**醫(yī)*科技出版社。消化使用的胰酶是含EDTA還是不含的?
在組織細(xì)胞的體外培養(yǎng)和原代細(xì)胞培養(yǎng)中的組織細(xì)胞分散(將組織塊制備成單個細(xì)胞懸液)以及傳代細(xì)胞培養(yǎng)中,貼壁生長細(xì)胞的消化分散均要使用組織細(xì)胞消化液。常用的消化液為胰蛋白酶 (Trypsin) ,EDTA 等。胰蛋白酶是一種絲氨酸水解酶,它能把多肽鏈中賴氨酸和精氨酸殘基中的羧基側(cè)切段,水解細(xì)胞間的蛋白質(zhì),破壞細(xì)胞間的連接,從而使組織或貼壁細(xì)胞離散成單個細(xì)胞。胰酶分散細(xì)胞的活性與組織或細(xì)胞的特性、胰酶濃度、溫度和作用時間有關(guān),在PH 8.0和37℃時,胰酶的作用能力**強,因此使用胰酶時,應(yīng)把握好濃度、溫度和時間,以免消化過度造成細(xì)胞損傷。一般常用胰酶的工作濃度為0.25%,而半貼壁細(xì)胞或?qū)σ让该舾械募?xì)胞常采用低濃度(0.05%)的胰酶進(jìn)行細(xì)胞消化。由于EDTA能夠螯合Ca2+和Mg2+,從而破壞細(xì)胞連接促進(jìn)細(xì)胞的解離,因此在胰酶溶液中常常會加入一定量的EDTA混合使用,以增強解離效果。胰酶細(xì)胞消化液含 0.25%胰酶和 0.02%EDTA。胰酶進(jìn)口
胰酶在PH值7.2-8.0的時候,溶液呈淡紅色。河南EDTA胰酶采購
0.25%胰酶是細(xì)胞生物學(xué)中常用的一種生物試劑,下面匯總一下胰酶使用過程中常見的一些問題。
胰酶的使用濃度是多少?胰酶濃度:常用0.25%胰酶+0.02%EDTA作為消化液。
胰酶的保存胰酶可在-20℃下保存一年。隨著時間延長,胰酶的消化能力減弱。胰酶可分裝凍存,在使用前從-20℃冰箱取出。盡量避免在4℃長期保存。胰酶使用的時候要注意什么?(1)在使用胰酶細(xì)胞消化液的過程中要特別注意避免消化液被細(xì)菌污染。(2)胰酶細(xì)胞消化液消化細(xì)胞時間不宜過長,否則細(xì)胞鋪板后生長狀況會較差。 河南EDTA胰酶采購