新疆進(jìn)口胰酶常見問題

淡黃色的胰酶溶液能放心使用嗎？能，對于胰酶呈黃色的問題，不同品牌也都對此現(xiàn)象進(jìn)行了測試實驗。變色的胰酶同樣能很好的用于細(xì)胞的解離，請放心使用。細(xì)胞消化時，胰酶不去除對細(xì)胞的影響？細(xì)胞消化時，如果消化液中只有胰酶，不含EDTA，不去除是沒有問題的。如果消化液中含有胰酶和EDTA，比較好去除。EDTA是一種化學(xué)螯合劑，主要作用在于能螯合Ca、Mg離子，使細(xì)胞分離。但EDTA不能被血清中和，消化后要徹底清洗去除，否則細(xì)胞易脫壁。胰酶胰酶和EDTA聯(lián)合使用可提高消化效率，所以常二者合用。胰酶的保存胰蛋白酶溶液作為細(xì)胞分離試劑廣泛應(yīng)用于貼壁細(xì)胞的連續(xù)培養(yǎng)。新疆進(jìn)口胰酶常見問題

0.25%胰酶是細(xì)胞生物學(xué)中常用的一種生物試劑，下面匯總一下胰酶使用過程中常見的一些問題。

胰酶的使用濃度是多少？胰酶濃度：常用0.25%胰酶+0.02%EDTA作為消化液。

胰酶的保存胰酶可在-20℃下保存一年。隨著時間延長，胰酶的消化能力減弱。胰酶可分裝凍存，在使用前從-20℃冰箱取出。盡量避免在4℃長期保存。胰酶使用的時候要注意什么？（1）在使用胰酶細(xì)胞消化液的過程中要特別注意避免消化液被細(xì)菌污染。（2）胰酶細(xì)胞消化液消化細(xì)胞時間不宜過長，否則細(xì)胞鋪板后生長狀況會較差。 安徽胰酶哪家便宜淡黃色的胰酶溶液能放心使用嗎？

    在組織細(xì)胞的體外培養(yǎng)和原代細(xì)胞培養(yǎng)中的組織細(xì)胞分散（將組織塊制備成單個細(xì)胞懸液）以及傳代細(xì)胞培養(yǎng)中，貼壁生長細(xì)胞的消化分散均要使用組織細(xì)胞消化液。常用的消化液為胰蛋白酶(Trypsin)，EDTA等。胰蛋白酶是一種絲氨酸水解酶，它能把多肽鏈中賴氨酸和精氨酸殘基中的羧基側(cè)切段，水解細(xì)胞間的蛋白質(zhì)，破壞細(xì)胞間的連接，從而使組織或貼壁細(xì)胞離散成單個細(xì)胞。胰酶分散細(xì)胞的活性與組織或細(xì)胞的特性、胰酶濃度、溫度和作用時間有關(guān)，在℃時，胰酶的作用能力**強(qiáng)，因此使用胰酶時，應(yīng)把握好濃度、溫度和時間，以免消化過度造成細(xì)胞損傷。一般常用胰酶的工作濃度為，而半貼壁細(xì)胞或?qū)σ让该舾械募?xì)胞常采用低濃度（）的胰酶進(jìn)行細(xì)胞消化。由于EDTA能夠螯合Ca2+和Mg2+，從而破壞細(xì)胞連接促進(jìn)細(xì)胞的解離，因此在胰酶溶液中常常會加入一定量的EDTA混合使用，以增強(qiáng)解離效果。但是對于EDTA可能會干擾后續(xù)的測試分析時，推薦選擇不含EDTA的消化液。本產(chǎn)品含有(Trypsin)，溶于無鈣鎂平衡鹽溶液中，經(jīng)過濾除菌，可以直接用于培養(yǎng)細(xì)胞和組織的消化。為改良型，除了具有方便快速、穩(wěn)定安全、細(xì)胞狀態(tài)好等特點之外，消化時間更短，消化效果媲美進(jìn)口產(chǎn)品，特別適用于難消化的細(xì)胞。

    ①制備粗酶液稱取定量粗胰酶，其胰蛋白酶活性為，胰淀粉酶活性為，胰脂肪酶活性為。將其用pH值為、濃度為0．2mol/L的乙酸-乙酸鈉緩沖液溶解，然后進(jìn)行真空過濾，收集濾液并用磷酸緩沖液進(jìn)行稀釋，使胰蛋白酶活性為3-10U/mg，備用。②制備反膠束將AOT置于100℃烘箱中干燥至恒重，放入干燥器中冷卻至室溫。然后稱取，加入10L異辛烷，在攪拌下使其形成均勻的分散液，再加入定量蒸餾水，在200r/min的轉(zhuǎn)速下處理2h，獲得濃度為。使用時用異辛烷稀釋10倍。③萃取將稀釋10倍的AOT-異辛烷反膠束置于萃取器中，按照AOT異辛烷反膠束：粗酶溶液體積比為（2-3):1的比例加入粗酶溶液萃取3-4次，，在300-400r/min的轉(zhuǎn)速下萃取5-10min。如此每次萃取完成后，均進(jìn)行離心分離，離心機(jī)轉(zhuǎn)速為4000-6000r/min，時間10-15min收集、合并離心上層清液，進(jìn)行反萃取，下層萃余液用于制備胰脂肪酶。④反萃取將荷載胰蛋白酶的AOT-異辛烷反膠束置于萃取器中，在攪拌下加入等體積的反萃取液進(jìn)行反萃取15-20min萃取液為0．。如此反萃取3次，每次萃取完成后，均進(jìn)行離心分離，離心機(jī)轉(zhuǎn)速為4000-6000r/min,時間為15-20min。分別收集、合并離心上層清液和下層反萃取液，前者再生后可再次萃取胰蛋白酶。 消化液經(jīng)過過濾除菌,可以直接用于培養(yǎng)細(xì)胞的消化,或者一些組織的消化。

常用的消化酶有:胰酶：用得**多的是胰酶。一般濃度在0.25-0.5%。作用時間根據(jù)干細(xì)胞種類、作用溫度等因素而變化很大，從幾分鐘到幾十分鐘不等。0.25%的胰酶作用于單層貼壁的干細(xì)胞，在37度條件下，一般消化1-5分鐘就足夠了。終止是用血清。主要作用于干細(xì)胞間。配制時不能用含鈣、鎂的平衡液，否則影響活性。保存于-20度。膠原酶：膠原酶是比較少用的，一般是用原代培養(yǎng)時，從組織消化下干細(xì)胞。這種方法作用溫和，對干細(xì)胞損傷較小，但是，價格也較貴。中止同樣是用血清。胰酶的質(zhì)量是影響干細(xì)胞的消化的關(guān)鍵因素之一，如果配的比較標(biāo)準(zhǔn)，消化的時候就容易消化，反之就不易消化。還要在你看到消化過頭的情況下，如果干細(xì)胞下來的比較多了，這時可以連同cmf或pbs加上營養(yǎng)液一起傳。營養(yǎng)液中有血清，胰酶遇到血清就會自動終止消化，但這樣操作對干細(xì)胞是有一定的影響的。對于容易消化的干細(xì)胞，加入pbs緩沖液洗去血清或加入胰酶，先中和血清的作用（30s），棄之，再加入適量胰酶作用10s-40s（根據(jù)細(xì)胞消化的難易程度），棄之，這樣依賴殘余的胰酶就可將干細(xì)胞消化單細(xì)胞。胰酶溶液中的二氧化碳與干冰揮發(fā)的二氧化碳可能會極少部分的氣體交換。中國澳門EDTA胰酶產(chǎn)品介紹

胰酶用0.05%還是0.25%的？需不需要含酚紅的？新疆進(jìn)口胰酶常見問題

胰蛋白酶(Trypsin)是由胰臟產(chǎn)生沒有活性的胰蛋白酶原分泌到小腸后，小腸內(nèi)的腸肽酶會活化該酶原，形成胰蛋白酶。胰蛋白酶的特點在于已經(jīng)活化的胰蛋白酶，能夠繼續(xù)活化更多胰蛋白酶原，這種過程即自動催化。胰蛋白酶在小腸工作，它會將蛋白質(zhì)水解為肽進(jìn)而分解為氨基酸，其**適溫度約為 37°℃。Trypsin solution(2.5%)由 2.5%胰酶組成，不含 EDTA，經(jīng)過濾除菌。本試劑可以直接用于培養(yǎng)細(xì)胞的消化，或者一些組織的消化，通常室溫下 1min 左右就可以消化下大多數(shù)貼壁細(xì)胞。該溶液濃度較高，可以稀釋到相應(yīng)濃度后使用。新疆進(jìn)口胰酶常見問題