南通成瘤疾病動物模型建模

技術(shù)領(lǐng)域：本發(fā)明屬于遺傳學(xué)和生物技術(shù)領(lǐng)域，具體涉及pirb基因敲入的小鼠動物模型，還涉及上述小鼠動物模型的構(gòu)建方法。背景技術(shù)：鼠源成對免疫球蛋白樣受體b(pairedimmunoglobulin-likereceptorb，pirb)，是人類免疫球蛋白樣受體b2(humanleukocyteimmunoglobulin(ig)-likereceptorb2，lilrb2)的同源基因，pirb基因(ncbireferencesequence：)位于小鼠的7號染色體近端，總大小為，編碼841個氨基酸，目前鑒定出15個外顯子，外顯子1起始密碼為atg，外顯子15的終止密碼子是tga(轉(zhuǎn)錄本：)。pirb蛋白屬于i型跨膜糖蛋白，包含由六個免疫球蛋白樣結(jié)構(gòu)域(domain，d)組成(d1-d6)的胞外段，一個疏水的跨膜段，三個免疫受體酪氨酸依賴的抑制序列(immunoreceptortyrosinebasedinhibitorymotifs，itims)和一個itims樣序列組成的胞內(nèi)段。理論上講，pirb的分子量約為92kd，但是western-blot分析中，pirb經(jīng)常位于105kd處，因為pirb是糖蛋白。以往研究發(fā)現(xiàn)，pirb在免疫系統(tǒng)和中樞調(diào)節(jié)中均發(fā)揮重要作用。在免疫系統(tǒng)中，pirb在許多造血細(xì)胞都有表達(dá)，包括b細(xì)胞、肥大細(xì)胞、巨噬細(xì)胞、粒細(xì)胞和樹突細(xì)胞，但是在胸腺細(xì)胞、成熟的t細(xì)胞和自然殺傷細(xì)胞不表達(dá)。這類動物疾病模型是指各種疾病共同性的一些病理變化過程的模型。南通成瘤疾病動物模型建模

葡聚糖硫酸鈉（DSS）致潰瘍性結(jié)腸炎小鼠模型：1、動物模型名稱：葡聚糖硫酸鈉（DSS）致潰瘍性結(jié)腸炎小鼠模型2、實(shí)驗動物種屬：BALB/c小鼠3、實(shí)驗動物性別：雄性4、實(shí)驗動物年齡：成年鼠5、實(shí)驗動物體重：18g-22g6、實(shí)驗動物環(huán)境：SPF級1、實(shí)驗方法：實(shí)驗前小鼠禁食不禁水24h，24小時后提起鼠尾將其懸空，使掙扎以排出大腸遠(yuǎn)端的大便。小鼠自由飲用5%葡聚糖硫酸鈉（DSS）溶液，連續(xù)14天。進(jìn)行疾病活動指數(shù)(DAI)的評估、取結(jié)腸進(jìn)行組織病理學(xué)檢查。2、檢測標(biāo)準(zhǔn)：DAI評分明顯升高，與對照組比較具統(tǒng)計學(xué)意義。結(jié)腸病理鏡檢可見結(jié)腸炎癥、病變深度、隱窩破壞、潰瘍病變泰州阿爾茲海默癥疾病動物模型建模上海東寰為您提供完善的大鼠動物疾病模型。

為了減少擴(kuò)增突變的引入，推薦使用高保真PCRMix進(jìn)行擴(kuò)增，推薦使用預(yù)線性化的質(zhì)粒作為模板，以減少環(huán)狀質(zhì)粒模板殘留對克隆陽性率的影響。注意：以環(huán)狀質(zhì)粒為模板時，PCR產(chǎn)物需要使用DpnI等甲基化敏感型限制性內(nèi)切酶對擴(kuò)增產(chǎn)物進(jìn)行處理，或?qū)Ξa(chǎn)物進(jìn)行膠回收純化。2.插入片段制備引物設(shè)計原則：通常使用PCR擴(kuò)增的方法來獲得目的片段，PCR引物的5端必須包含與其相鄰片段（插入片段或載體）末端同源的15~25nt（推薦18nt）序列,以保證擴(kuò)增產(chǎn)物的5端和3端分別與相鄰片段形成重疊序列。目的片段PCR引物包括：載體與插入片段連接處引物、插入片段與片段連接處引物。插入片段正向擴(kuò)增引物：5—上游載體末端正向同源序列+酶切位點(diǎn)（可選）+基因特異性正向擴(kuò)增序列—3’插入片段反向擴(kuò)增引物：3‘—基因特異性反向擴(kuò)增序列+酶切位點(diǎn)（可選）+下游載體末端反向同源序列—5’載體與插入片段、插入片段與片段連接處引物、載體反向擴(kuò)增引物設(shè)計制作終序列圖譜引物設(shè)計工具1.在線設(shè)計更加專業(yè)，這款軟件用來繪制圖譜，編輯序列，設(shè)計引物，重組克隆都非常方便3.無縫克隆1、體系配制；a.適載體用量（ng）=×載體堿基對數(shù)，即pmol（單片段、多片段適用）；b.適片段用量。

動物模型名稱：FSH聯(lián)合HCG致超排懷孕小鼠模型2、實(shí)驗動物種屬：KM小鼠或NIH小鼠3、實(shí)驗動物性別：雌性4、實(shí)驗動物年齡：3~4周齡5、實(shí)驗動物體重：16~18g6、實(shí)驗動物環(huán)境：SPF級1、實(shí)驗方法：注射用重組人促卵泡***（FSH）聯(lián)合注射絨促性素（HCG）誘導(dǎo)。對雌鼠于按5IU/只腹腔注射50IU/mL的FSH溶液，注射46~48h后按5IU/只再腹腔注射50IU/mL的HCG溶液，并于注射HCG當(dāng)天下午約16：00~17：00按雌雄鼠1：1合籠。次日早上檢查雌鼠陰栓情況。2、檢測標(biāo)準(zhǔn)：合籠后次日雌鼠檢查出現(xiàn)陰栓，表明成功構(gòu)建了超排懷孕小鼠模型。大鼠疾病建模請找上海東寰。

即為本發(fā)明構(gòu)建的一種pirb基因敲入的小鼠動物模型。本發(fā)明所采用第二種技術(shù)方案的特點(diǎn)還在于，步驟1中得到grna1和grna2后分別與trancrrna在25℃孵育10min形成二級結(jié)構(gòu)。步驟3中g(shù)rna1、grna2的濃度均為2～10pmol/ul，cas9蛋白的注射濃度為30～100ng/μl。步驟4中southern雜交采用bamhi和avrii核酸內(nèi)切酶切割f1代雜合子小鼠的dna。本發(fā)明的有益效果是：本發(fā)明提供了pirb基因敲入的小鼠動物模型及其構(gòu)建方法，本發(fā)明的小鼠動物模型對于pirb基因功能的研究和在體驗證提供了良好的基礎(chǔ)。分離自pirb基因敲入小鼠的細(xì)胞還可以用于研究pirb發(fā)揮調(diào)節(jié)作用的下游機(jī)制。疾病動物模型建模有加些方式？纖維化疾病動物模型建模

早期階段科學(xué)假說與疾病潛在藥物治療效果評價始于小鼠疾病模型構(gòu)建及其實(shí)驗室研究。南通成瘤疾病動物模型建模

動物模型名稱：低鐵飼料聯(lián)合放血致缺鐵性貧血大鼠模型2、實(shí)驗動物種屬：SD大鼠3、實(shí)驗動物性別：雌性4、實(shí)驗動物年齡：初斷乳5、實(shí)驗動物體重：50~70g6、實(shí)驗動物環(huán)境：SPF級1、實(shí)驗方法：低鐵飼料聯(lián)合放血法誘導(dǎo)。SD大鼠每天給予低鐵飼料和超純水飼養(yǎng)，并每周通過眼底靜脈叢放血1mL，連續(xù)3周。2、檢測標(biāo)準(zhǔn)：血紅蛋白含量明顯下降，紅細(xì)胞內(nèi)游離原卟啉明顯升高。1.提供動物模型構(gòu)建過程中的原始實(shí)驗記錄及數(shù)據(jù)圖片。2.根據(jù)要求提供構(gòu)建成功的模型動物或相關(guān)組織材料。南通成瘤疾病動物模型建模