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具有保密性的材料除外）。2、目的蛋白相應(yīng)一抗：請您提供質(zhì)量保證的一抗（或委托我公司準(zhǔn)備）?？贵w的使用量通過預(yù)實(shí)驗(yàn)后進(jìn)行確認(rèn)，原則上不回收使用一抗。3、陽性對照樣品（盡量提供）。4、相關(guān)文獻(xiàn)（可選）。注：若要檢測磷酸化蛋白，請在2-3個月內(nèi)進(jìn)行，因?yàn)殚L時間保存的樣品容易使磷酸化蛋白去磷酸化而檢測不到磷酸化條帶。五、提交給客戶結(jié)果1、預(yù)實(shí)驗(yàn)顯色結(jié)果（TIFF格式、JPEG格式或PNG格式），預(yù)實(shí)驗(yàn)采取3個一抗稀釋度，選取部分實(shí)驗(yàn)樣本。2、正式實(shí)驗(yàn)顯色結(jié)果（TIFF格式、JPEG格式或PNG格式）。3、完整實(shí)驗(yàn)報告。六、服務(wù)項目說明1、提供的蛋白量與待檢測的目的蛋白數(shù)量有關(guān)，蛋白數(shù)量增加相應(yīng)的樣品量也要增加。2、每張膜樣品數(shù)量為1-8個，不足8個以8個收取。9-16個樣品為2張膜，17-24個樣品為3張膜；以此類推。舉例：7個樣品，1個目的蛋白，算1張膜；有9個樣品，1個目的蛋白，算2張膜；7個樣品，2個目的蛋白，算2張膜，有9個樣品，2個目的蛋白，算4張膜。注：以上為一般算法。如果客戶樣品數(shù)量需要按照組別等來進(jìn)行上樣時，需要重新確定每張膜的上樣量及膜的張數(shù)。3、選擇部分樣品進(jìn)行預(yù)實(shí)驗(yàn)，參考目的蛋白一抗說明書進(jìn)行3個稀釋度的預(yù)實(shí)驗(yàn)。EdU細(xì)胞增殖檢測試劑盒應(yīng)用再哪些地方？江西品質(zhì)好的EdU細(xì)胞增殖檢測試劑盒哪家好

免疫熒光技術(shù)服務(wù)免疫熒光技術(shù)服務(wù)（DH0014）一、服務(wù)介紹免疫熒光技術(shù)（Immunofluorescencetechnique）又稱熒光抗體技術(shù)，是標(biāo)記免疫技術(shù)中發(fā)展*早的一種。將抗原或抗體用熒光素進(jìn)行標(biāo)記，標(biāo)記的抗原或標(biāo)記的抗體與相應(yīng)的抗體或抗原反應(yīng)后，測定復(fù)合物中的熒光素，這種免疫技術(shù)稱為免疫熒光素技術(shù)。免疫熒光細(xì)胞化學(xué)分直接法、夾心法、間接法和補(bǔ)體法。二、服務(wù)內(nèi)容及價格服務(wù)編號服務(wù)內(nèi)容服務(wù)價格服務(wù)周期（工作日）DH0014-01免疫熒光單標(biāo)記檢測咨詢咨詢DH0014-02免疫熒光雙標(biāo)記檢測咨詢咨詢?nèi)?、客戶提?、細(xì)胞株或細(xì)胞爬片。注：細(xì)胞爬片不宜太密；2、熒光檢測所用的抗體3、實(shí)驗(yàn)前，客戶需告知具體的細(xì)胞處理方式及詳細(xì)要求。注：若有特殊處理的樣品，請盡可能出示相關(guān)材料（具有保密性的材料除外）。四、服務(wù)流程免疫熒光單標(biāo)記方法免疫熒光單標(biāo)記是指只標(biāo)記一種蛋白質(zhì)分子，方法比較簡單，只要按照染色步驟去做，通常不存在太多的問題。但要注意固定液的選擇，固定液選擇的合適與否，可能會直接影響染色結(jié)果。具體染色方法如下。1、所需材料與試劑a,培養(yǎng)在蓋玻片或玻璃培養(yǎng)皿中融合程度達(dá)到60%-70%的細(xì)胞。b,一抗、FITC或TRITC標(biāo)記的二抗。c。湖南哪一家EdU細(xì)胞增殖檢測試劑盒廠家EdU細(xì)胞增殖檢測試劑盒可以去哪里購買？

避免反復(fù)凍融。如短時間內(nèi)需多次重復(fù)使用，請于4℃避光保存，有效期半年。使用前須知該試劑是采用成像檢測方法對貼壁細(xì)胞進(jìn)行檢測，適用于熒光顯微鏡、共聚焦顯微鏡等儀器。非貼壁細(xì)胞可在孵育EU后進(jìn)行細(xì)胞涂片處理，固定后再采用貼壁細(xì)胞的染色流程進(jìn)行檢測。實(shí)驗(yàn)準(zhǔn)備1、蓋玻片2、1×PBS（）（用DEPC水配置）3、含TritonX-100的PBS（用DEPC水配置）4、甘氨酸溶液(2mg/ml)（用DEPC水配置）5、培養(yǎng)板或培養(yǎng)皿實(shí)驗(yàn)參考96孔板48孔板24孔板12孔板6孔板EU培養(yǎng)基100μl200μl300μl500μl1ml染色反應(yīng)液100μl200μl300μl500μl1ml實(shí)驗(yàn)步驟(以96孔板，HK2貼壁細(xì)胞為例)細(xì)胞培養(yǎng)取對數(shù)生長期細(xì)胞，以每孔4×103~1×105細(xì)胞接種于96孔板中，培養(yǎng)至正常狀態(tài)。EU標(biāo)記1、將細(xì)胞完全培養(yǎng)基中按照500：1的比例加入EU溶液，制成2×EU標(biāo)記培養(yǎng)基；2、提前將2×EU標(biāo)記培養(yǎng)基預(yù)熱，然后等體積加入到細(xì)胞原有培養(yǎng)基中，獲得1×EU溶液，其中EU的終濃度為500μM；注：1）我們不建議替換全部培養(yǎng)基，因?yàn)檫@樣可能會影響細(xì)胞增殖的速度；2）配置好的培養(yǎng)基建議現(xiàn)用現(xiàn)配，用量以沒過細(xì)胞為宜；3、每孔加入300μl含EU培養(yǎng)基孵育細(xì)胞2小時，棄培養(yǎng)基。

與BrdU方法相比，EdU檢測方法無需DNA變性，無需抗原修復(fù)，無需抗原抗體反應(yīng)，更簡單、更靈敏、更快速、更準(zhǔn)確，是細(xì)胞增殖檢測的比較好選擇。更準(zhǔn)確--無需DNA變性(酸解、熱解、酶解等)，可有效避免變性帶來的樣品損傷，確保細(xì)胞核邊緣清晰完整；更簡單--無需抗原抗體反應(yīng)，基于小分子化學(xué)反應(yīng)的檢測方法，簡單高效，反應(yīng)單需要幾分鐘；更靈敏--無需抗體，檢測染料單為BrdU抗體的1/500，更容易擴(kuò)散，即使單個增殖細(xì)胞也能準(zhǔn)確檢測；更快速--無需過夜，省卻了抗原抗體反應(yīng)的復(fù)雜繁瑣步驟，完成整個檢測周期單需2.5小時；更兼容--對樣品幾乎無損傷，更容易與多種抗體或熒光蛋白同時標(biāo)記，能夠同時檢測細(xì)胞其他性狀特征。EdU細(xì)胞增殖檢測試劑盒價格。

EdU標(biāo)記(a)將細(xì)胞完全培養(yǎng)基中按照500:1的比例加入EdU溶液，制成2xEdU標(biāo)記培養(yǎng)基；(b)提前將2xEdU標(biāo)記培養(yǎng)基預(yù)熱，然后等體積加入到細(xì)胞原有培養(yǎng)基中，獲得lxEdU溶液，其中EdU的終濃度為10uM；注：1)我們不建議替換全部培養(yǎng)基，因?yàn)檫@樣可能會影響細(xì)胞增殖的速度；2)配置好的培養(yǎng)基建議現(xiàn)用現(xiàn)配，用量以沒過細(xì)胞為宜；(c)每孔加入300ul含EdU培養(yǎng)基孵育細(xì)胞2小時，棄培養(yǎng)基；注：1)培養(yǎng)時間取決于細(xì)胞的增殖速度和生長狀態(tài)；2)大多數(shù)**細(xì)胞以及粘附細(xì)胞系均可采用2小時的孵育時間(d)以lxPBS清洗細(xì)胞兩次，毎次5分鐘，以除去未摻入DNA的EdU殘留EdU細(xì)胞增殖檢測試劑盒怎樣使用？上海東寰告訴您。江蘇品質(zhì)好的EdU細(xì)胞增殖檢測試劑盒購買

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4%多聚甲醛固定液或冷**固定液(-20℃預(yù)冷20min)。d,封閉液。e,／LPBS緩沖液。2、染色方法a,取出培養(yǎng)有細(xì)胞的蓋玻片，用洗2-3遍。b,加入4%多聚甲醛試問固定30minc.加入的Tritonx-100,37℃,5min，PBS洗兩次，5min/次d.加入含、1%BSA的PBS中室溫封閉30min-1h。e.去封閉液，直接加入一抗，37℃孵育1h或4℃過夜?？贵w以mo/LPBS稀釋(理想的抗體濃度需經(jīng)試驗(yàn)而定)。，10min/次g.加入FITC-二抗或TRITC-二抗，37℃，孵育1h。，10min/次，用濾紙吸干。(PBS配制)封片。j.免疫熒光顯微鏡下觀察，或于4℃避光保存。免疫熒光雙標(biāo)記方法免疫熒光的雙標(biāo)記是指同時標(biāo)記細(xì)胞內(nèi)兩種蛋白質(zhì)分子，當(dāng)懷疑某種配體與已知受體結(jié)合后可用此方法加以證明。此方法稍微復(fù)雜一些，應(yīng)注意所用的一抗是來自不同種屬動物的兩種特異性抗體(例如：A抗體為多克隆抗體，來自家兔；B抗體為單克隆抗體，來自小鼠)。其次，兩種二抗所帶熒光素的發(fā)射光不應(yīng)重疊，且盡量遠(yuǎn)離，通常可以選擇FITC和TRITC、Alex488和TRITC、FITC和Cy5，或Cy3和Cy5等來組合。通常情況下，染色時兩種一抗可以同時孵育，然后可以同時孵育兩種二抗。但當(dāng)染色結(jié)果一種顏色非常弱，而另一種顏色比較強(qiáng)時，應(yīng)考慮先孵育顏色較弱的二抗。江西品質(zhì)好的EdU細(xì)胞增殖檢測試劑盒哪家好