挑選一家靠譜的實驗外包公司，需要注意。報價單一定要有明細(xì)。規(guī)范的外包公司會根據(jù)實驗方案里的各項內(nèi)容進行核算報價，材料是多少、人工檢測是多少，可以看到每一筆錢花在哪里，避免籠統(tǒng)的報價。另外注意不要一味地追求低價，做過實驗的都知道實驗成本，外包還需要考慮人工成本。...

PCR實驗技術(shù)中的兼并引物PCR（DegeneratePrimer）介紹：兼并引物是指代替編碼單個氨基酸所有不同堿基可能性的不同序列的混合物。兼并度越低，產(chǎn)物特異性越強。設(shè)計引物時應(yīng)盡量選擇兼并性小的氨基酸，并避免引物3’末端兼并，因為3'端末尾3個堿基的退火...

細(xì)胞長滿80%瓶底或皿底，換培養(yǎng)液，第二天提取RNA(倒掉培養(yǎng)液，5-10ml冰PBS洗滌細(xì)胞2次空干)加1ml冰TRizoL,用力振蕩培養(yǎng)瓶使細(xì)胞完全脫落，加樣器吹打(吸入1.5ml離心管，旋渦振蕩10秒，室溫靜置5分鐘)加氯仿200ul,漩渦混勻器振蕩10...

pcr防止污染的方法(一)合理分隔實驗室:將樣品的處理、配制PCR反應(yīng)液、PCR循環(huán)擴增及PCR產(chǎn)物的鑒定等步驟分區(qū)或分室進行。(二)吸樣器:吸樣器污染是一個值得注意的問題。由于操作時不慎將樣品或模板核酸吸入器內(nèi)或粘上器頭是一個嚴(yán)重的污染源，因而加樣或吸取模板...

PCR出現(xiàn)非特異性擴增帶的原因分析：PCR擴增后出現(xiàn)的條帶與預(yù)計的大小不一致，或大或小，或者同時出現(xiàn)特異性擴增帶與非特異性擴增帶。非特異性條帶的出現(xiàn)，其原因：一是引物與靶序列不完全互補、或引物聚合形成二聚體。二是Mg2+離子濃度過高、退火溫度過低，及PCR循環(huán)...

PCR樣本可分2種，DNA樣本和RNA樣本。一，DNA樣本：已經(jīng)提取好的DNA樣本，負(fù)80度保存，干冰運輸；血液樣本，需全血，加入抗凝劑，抗凝管4度保存；組織樣本，需凍存管或干凈滅菌的離心管裝，負(fù)80度保存，干冰運輸；細(xì)胞樣本，用胰酶消化后的細(xì)胞沉淀，負(fù)20度...

PCR實驗技術(shù)的發(fā)展歷程，Khorana(1971)等**早提出核酸體外擴增的設(shè)想：“經(jīng)DNA變性，與合適的引物雜交，用DNA聚合酶延伸引物，并不斷重復(fù)該過程便可合成tRNA基因?！?983年4月的一個星期五晚上，他開車去鄉(xiāng)下別墅的路上,猛然閃現(xiàn)出“多聚酶鏈?zhǔn)?..

PCR產(chǎn)物是否為特異性擴增，其結(jié)果是否準(zhǔn)確可靠，必須對其進行嚴(yán)格的分析與鑒定，才能得出正確的結(jié)論。PCR產(chǎn)物的分析，可依據(jù)研究對象和目的不同而采用不同的分析方法。凝膠電泳分析：PCR產(chǎn)物電泳，EB溴乙錠染色紫外儀下觀察，初步判斷產(chǎn)物的特異性。PCR產(chǎn)物片段的大...

PCR實驗室設(shè)計的中心問題是如何避免污染。在實際工作中，常見的有以下幾種污染類型：擴增產(chǎn)物的污染；天然基因組DNA的污染；試劑的污染以及標(biāo)本間的污染。由于一旦發(fā)生污染，實驗就必須停止，直到找到污染源為止，而且實驗結(jié)果必須作廢，需重新進行實驗。所以發(fā)生污染后再圍...

PCR由變性--退火--延伸三個基本反應(yīng)步驟構(gòu)成： 1、模板DNA的變性：模板DNA經(jīng)加熱至93℃左右一定時間后，使模板DNA雙鏈或經(jīng)PCR擴增形成的雙鏈DNA解離，使之成為單鏈，以便它與引物結(jié)合，為下輪反應(yīng)作準(zhǔn)備。 2、模板DNA與引物的退火...

PCR實驗技術(shù)中的MSP甲基化特異PCR介紹：一般調(diào)控區(qū)保持甲基化狀態(tài)，基因不表達(dá)直接干擾轉(zhuǎn)錄因子和啟動子識別位點的結(jié)合與轉(zhuǎn)錄抑制因子結(jié)合引起基因沉默改變?nèi)旧|(zhì)的結(jié)構(gòu)MSP甲基化特異PCR是用對苯二酚和亞硫酸氫鈉處理氫氧化鈉變性的基因組DNA，使得未甲基化的C...

PCR實驗技術(shù)中的反向PCR介紹：反向PCR的目的在于擴增一段已知序列旁側(cè)的DNA，也就是說這一反應(yīng)體系不是在一對引物之間而是在引物外側(cè)合成DNA.反向PCR可用于研究與已知DNA區(qū)段相連接的未知染色體序列，因此又稱為染色體步移。這時選擇的引物雖然與中心DNA...

原位PCR就是在組織細(xì)胞里進行PCR反應(yīng)，它結(jié)合了具有細(xì)胞定位能力的原位雜交和高度特異敏感的PCR技術(shù)的優(yōu)點，是細(xì)胞學(xué)科研與臨床診斷領(lǐng)域里的一項有較大潛力的新技術(shù)。原位PCR是Hasse等于1990年建立的，實驗用的標(biāo)本是新鮮組織、石蠟包埋組織、脫落細(xì)胞、血細(xì)...

PCR實驗技術(shù)中的巢氏PCR（NestedPCR）介紹：巢氏PCR需要兩到三對引物，一般采用較為套引物擴增15-30個循環(huán)，再用擴增DNA的片段內(nèi)設(shè)定的第二套引物擴增15-30個循環(huán)，這樣可使待擴增序列得到高效擴增，而次級結(jié)構(gòu)卻很少擴增。套式引物PCR減少了引...

PCR實驗技術(shù)中的錨定PCR（AnchoredPCR）介紹：錨定PCR主要用于分析具有可變末端的DNA序列，Loh等用A-PCR對人外周血淋巴細(xì)胞T細(xì)胞受體α-鏈的mRNA的多變性進行了分析。先合成cDNA，并用末端脫氧核苷酸轉(zhuǎn)移酶在其3’-可變區(qū)末端加上一個...

PCR技術(shù)的基本原理類似于DNA的天然復(fù)制過程，DNA的半保留復(fù)制是生物進化和傳代的重要途徑。其特異性依賴于與靶序列兩端互補的寡核苷酸引物。PCR由變性-退火-延伸三個基本反應(yīng)步驟構(gòu)成：①模板DNA的變性：模板DNA經(jīng)加熱至93℃左右一定時間后，使模板DNA雙...

PCR實驗技術(shù)中的Touch-downPCR介紹：Touch-downPCR又稱降落PCR.即選定一個溫度范圍，如50—35℃，每降1-2℃進行1-2個循環(huán)，然后在50度下進行15個循環(huán)。Touch-down的原理隨著退火溫度的降低，特異性逐步降低，但特異性條...

PCR樣本可分2種，DNA樣本和RNA樣本。一，DNA樣本：已經(jīng)提取好的DNA樣本，負(fù)80度保存，干冰運輸；血液樣本，需全血，加入抗凝劑，抗凝管4度保存；組織樣本，需凍存管或干凈滅菌的離心管裝，負(fù)80度保存，干冰運輸；細(xì)胞樣本，用胰酶消化后的細(xì)胞沉淀，負(fù)20度...

HE染色構(gòu)成組織內(nèi)蛋白質(zhì)的氨基酸的種類很多，它們有不同的等電點。在普通染色法中，染色液的酸堿度為pH6左右，細(xì)胞內(nèi)的酸性物質(zhì)如細(xì)胞核的染色質(zhì)、腺細(xì)胞和神經(jīng)細(xì)胞內(nèi)的粗面內(nèi)質(zhì)網(wǎng)及透明軟骨基質(zhì)等均被堿性染料染色，這些物質(zhì)稱為嗜堿性。而細(xì)胞質(zhì)中的其它蛋白質(zhì)如紅細(xì)胞中的...

HE染色常見問題：成片的染色模糊不清，灰染答：（1）組織未及時固定，部分自溶；或固定不佳，深部組織未處理到。這種只能重新固定了。（2）盡管乙醇也是一種固定液，但盡量少用或不用，因為其會導(dǎo)致組織發(fā)硬變脆，染色效果不好。（3）包埋時蠟的溫度過高，或切片后烤片時間和...

HE染色伊紅溶液中加入少量的冰醋酸(一般小于10%就行)，可改變組織等電點，促進伊紅與胞漿蛋白質(zhì)結(jié)合，其本身不參與染色的反應(yīng)。當(dāng)蘇木素染色效能極高，很短時間就導(dǎo)致核漿共染時，可適當(dāng)?shù)靥砑颖姿?一般不超過2%)，抑制蘇木素染色效能，方便控制染色時間，同時也能提...

HE染色病理技術(shù)中**常用的一種方法，通過它可以做出病理診斷和發(fā)現(xiàn)尋求別的輔助方法，以達(dá)到準(zhǔn)確，完整的病理診斷。一、染色目的 病理學(xué)的所有切片，都必須通過一種以上的染料，通過各種不同的方法，將切片中各種不同的物質(zhì)，在不同染液的作用下，將其顯示出來，使之在光學(xué)顯...

HE染色骨組織的處理方式：組織里存有鈣鹽可妨礙用常規(guī)方法制作良好切片。骨組織及鈣化病灶，經(jīng)過固定后，需要先將鈣鹽除去使組織軟化，才能進行常規(guī)切片。如果脫鈣不全，則切片容易撕開或碎裂，損傷切片刀刀刃。脫去鈣鹽的過程，稱為脫鈣。骨組織固定24小時后，鋸下不超過0....

HE染色切片中出現(xiàn)類似色素樣的點狀結(jié)晶和黑色光滑的細(xì)胞核原因：切片封片前放置在空氣中時間太長，以至于二甲苯揮發(fā)切片干燥所致。對策：移去組織切片上的蓋玻片和封固劑，重新處理。將切片水洗數(shù)分鐘，然后重新脫水、透明、封固。封片過程中要保持組織切片的輕度濕潤，盡量不要...

HE染色主要是為通細(xì)胞及胞核形態(tài)、大小來區(qū)別各種細(xì)胞的，并不是直接通過顏色來區(qū)分的，HE染色細(xì)胞壞死的三種改變：（1）細(xì)胞核的改變：這是細(xì)胞壞死的主要形態(tài)標(biāo)志，表現(xiàn)為核濃縮，核碎裂，核溶解。（2）細(xì)胞質(zhì)的改變：由于胞質(zhì)發(fā)生凝固或溶解，HE染色呈深紅色顆粒狀，如...

HE染色堿染料染主要使細(xì)胞核內(nèi)的染色質(zhì)與胞質(zhì)內(nèi)的核糖體著色。學(xué)上常用的一種染色方法為蘇木精 伊紅染色法。蘇木精 伊紅染色法 （ hematoxylin-eosin staining ） ，簡稱HE染色法 ，石蠟切片技術(shù)里常用的染色法之一 。蘇木精染液為堿 ，主...

HE染色骨組織的處理方式：組織里存有鈣鹽可妨礙用常規(guī)方法制作良好切片。骨組織及鈣化病灶，經(jīng)過固定后，需要先將鈣鹽除去使組織軟化，才能進行常規(guī)切片。如果脫鈣不全，則切片容易撕開或碎裂，損傷切片刀刀刃。脫去鈣鹽的過程，稱為脫鈣。骨組織固定24小時后，鋸下不超過0....

HE染色反藍(lán)的原理：蘇木素染液，細(xì)胞核內(nèi)的染色質(zhì)主要是去氧核糖核酸（DNA）,DNA的雙螺旋結(jié)構(gòu)中，兩條鏈上的磷酸基向外，帶負(fù)電荷，呈酸性，很容易與帶正電荷的蘇木素精堿性染料以離子或氫鍵結(jié)合而被染色。蘇木精在堿性溶液中呈藍(lán)色，所以細(xì)胞核被染成藍(lán)色。 分化：蘇木...

HE染色樣本組織固定與切片：首先將組織樣本進行常規(guī)的石蠟包埋。在模具中加入液態(tài)石蠟，將待包埋的組織樣本放入石蠟中，確保組織位置規(guī)整。補充少許液態(tài)的石蠟后，進行降溫冷凍，使石蠟變?yōu)楣虘B(tài)達(dá)到組織固定的效果，然后使用石蠟切片機進行切片，厚度在４-８um左右。將切完后...

HE染色主要是為通細(xì)胞及胞核形態(tài)、大小來區(qū)別各種細(xì)胞的，并不是直接通過顏色來區(qū)分的，HE染色細(xì)胞壞死的三種改變：（1）細(xì)胞核的改變：這是細(xì)胞壞死的主要形態(tài)標(biāo)志，表現(xiàn)為核濃縮，核碎裂，核溶解。（2）細(xì)胞質(zhì)的改變：由于胞質(zhì)發(fā)生凝固或溶解，HE染色呈深紅色顆粒狀，如...