楊浦區(qū)品質(zhì)好的疾病動(dòng)物模型建模

來(lái)源: 發(fā)布時(shí)間:2024-07-22

    應(yīng)根據(jù)所檢測(cè)指標(biāo)的要求,需采取不同策略處理。在如今分子生物學(xué)當(dāng)?shù)赖默F(xiàn)實(shí)背景下,動(dòng)物實(shí)驗(yàn)除了對(duì)實(shí)驗(yàn)動(dòng)物的體征及生理指標(biāo)進(jìn)行的監(jiān)控外,各種分子檢測(cè)甚至是組學(xué)檢測(cè)也開(kāi)始大行其道,動(dòng)物實(shí)驗(yàn)結(jié)束之后的機(jī)制研究成為了實(shí)驗(yàn)的重頭戲。一般來(lái)說(shuō),動(dòng)物實(shí)驗(yàn)檢測(cè)對(duì)象主要包括:(1)體液中各類因子定性及定量檢測(cè)由于此類檢測(cè)對(duì)象多為蛋白及各類小分子物質(zhì),因此在取樣過(guò)程中應(yīng)注意防止此類物質(zhì)降解,在獲取后,應(yīng)及時(shí)置于溫(≤-80℃)進(jìn)行保存,在后續(xù)實(shí)驗(yàn)過(guò)程中,也應(yīng)當(dāng)注意保存條件的穩(wěn)定性,避免反復(fù)凍融。常用的方法便是酶聯(lián)免疫吸附測(cè)定(ELISA),除此之外,可利用生化分析儀及不同檢測(cè)方法的試劑盒(比色法、比濁法等)方法對(duì)各類生化指標(biāo)及因子進(jìn)行定性及定量檢測(cè)。(2)組織病理、生理變化及免疫組化檢測(cè)常用的病理檢測(cè)多使用H&E染色對(duì)細(xì)胞質(zhì)及細(xì)胞核進(jìn)行染色標(biāo)記,以觀察細(xì)胞變化。除此之外,許多特殊染色也在病理生理變化中得到了應(yīng)用,如利用Masson染色檢測(cè)組織纖維化病變,Nissl染色檢測(cè)神經(jīng)元損傷,β-半乳糖甘酶染色檢測(cè)細(xì)胞衰老等。此外,還可以通過(guò)免疫組化技術(shù)對(duì)某些特異性標(biāo)記物進(jìn)行免疫顯色檢測(cè),達(dá)到原位定性或定量檢測(cè)的目的。。查閱已有的相關(guān)小鼠模型綜述文獻(xiàn)。楊浦區(qū)品質(zhì)好的疾病動(dòng)物模型建模

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動(dòng)物模型名稱:皮膚淺II°及深I(lǐng)I°燙傷大鼠模型2、實(shí)驗(yàn)動(dòng)物種屬:SD大鼠3、實(shí)驗(yàn)動(dòng)物性別:雌雄不限4、實(shí)驗(yàn)動(dòng)物年齡:成年5、實(shí)驗(yàn)動(dòng)物體重:160-200g6、實(shí)驗(yàn)動(dòng)物環(huán)境:SPF級(jí)1、實(shí)驗(yàn)方法:熱力致皮膚損傷法。麻醉大鼠,根據(jù)體重腹部備皮,然后固定于實(shí)驗(yàn)臺(tái)上。將大鼠移近加熱純凈水的燒杯,將紗布條浸入熱水中,待水溫恒定于99℃時(shí),取出紗布,立即平鋪于待燙部位,于紗布接觸大鼠皮膚后開(kāi)始計(jì)時(shí)。致傷3s為淺II°燙傷,致傷10s為深I(lǐng)I°燙傷。2、檢測(cè)標(biāo)準(zhǔn):a.皮膚大體觀察:致傷3s大鼠局部皮膚發(fā)紅、輕微水腫。愈合后毛發(fā)生長(zhǎng)良好,有少量紅褐**素沉著,皮膚輕微攣縮,表皮光滑;致傷10s大鼠局部皮膚發(fā)白、水腫。愈合后毛發(fā)生長(zhǎng)良好,皮膚瘢痕形成,表面粗糙不平。b.皮膚組織病理學(xué)觀察:致傷3s大鼠表皮層次尚清楚,細(xì)胞明顯腫脹、變性,層次結(jié)構(gòu)尚清楚,細(xì)胞核結(jié)構(gòu)不清;致傷10s大鼠表皮細(xì)胞部分脫落,結(jié)構(gòu)不清,明顯變性、壞死,部分細(xì)胞已溶解揚(yáng)州如何使用疾病動(dòng)物模型建模動(dòng)物疾病模型廣泛應(yīng)用于新藥靶點(diǎn)發(fā)現(xiàn)及篩選。

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    ng)=×片段堿基對(duì)數(shù)(單片段);適片段用量(ng)=×片段堿基對(duì)數(shù)(多片段)。注1:?jiǎn)纹沃亟M反應(yīng),若單個(gè)插入片段的長(zhǎng)度大于載體,則應(yīng)將載體與插入片段的計(jì)算公式互換;注2:?jiǎn)纹沃亟M反應(yīng),若單個(gè)插入片段的長(zhǎng)度小于200bp,則插入片段應(yīng)使用5倍的用量;注3:多片段重組反應(yīng),各個(gè)插入片段的用量應(yīng)不少于10ng,使用上述公式計(jì)算適使用量低于此值時(shí),直接使用10ng;注4:若按上述公式計(jì)算出的線性化載體用量低于50ng或高于200ng,建議按50ng或200ng用量使用;注5:線性化載體過(guò)長(zhǎng),插入片段過(guò)長(zhǎng)或片段數(shù)過(guò)多,克隆陽(yáng)性率均會(huì)降低。2、體系反應(yīng);1、配制完成后,用移液器輕輕吸打混勻各組分,避免產(chǎn)生氣泡,切勿渦旋;2、將反應(yīng)體系置于50℃,反應(yīng)5~60min。3、將反應(yīng)液離心管置于冰上冷卻,之后進(jìn)行轉(zhuǎn)化或者儲(chǔ)存于-20℃注1:推薦使用PCR儀等溫控的儀器進(jìn)行反應(yīng),反應(yīng)時(shí)間不足或太長(zhǎng)克隆效率均會(huì)降低;注2:插入1~2個(gè)片段時(shí),推薦反應(yīng)時(shí)間為5~1min;插入3~5個(gè)片段時(shí),推薦反應(yīng)時(shí)間為15~30min;注3:當(dāng)載體骨架在10kb以上或插入片段總長(zhǎng)在4kb以上時(shí),推薦延長(zhǎng)反應(yīng)時(shí)間至30~60min;注4:建議在50℃反應(yīng)完成后進(jìn)行瞬時(shí)離心,將反應(yīng)液收集至管底。注5:-20℃儲(chǔ)存的重組產(chǎn)物。

該模型能夠幫助我們研究pirb基因在免疫系統(tǒng)和神經(jīng)系統(tǒng)的功能以及下游的調(diào)節(jié)機(jī)制。本發(fā)明的另一目的在于提供上述小鼠動(dòng)物模型的構(gòu)建方法。本發(fā)明所采用的第一種技術(shù)方案是:pirb基因敲入的小鼠動(dòng)物模型,包括確定pirb基因的待敲入的特異性靶位點(diǎn)grna1和grna2,將pirb基因敲入c57bl/6j小鼠的rosa26基因的內(nèi)含子1內(nèi),所述grna1的基因序列如seqid**所示,grna2的基因序列如。本發(fā)明所采用的第二種技術(shù)方案為:pirb基因敲入的小鼠動(dòng)物模型的構(gòu)建方法,將步驟3中性成熟的陽(yáng)性f0小鼠分別與野生型鼠交配繁一代,獲得f1代雜合子小鼠,通過(guò)pcr、測(cè)序和southern雜交確定動(dòng)物基因型;將步驟4獲得的f1代雜合子小鼠近交獲得f2代純合子小鼠。動(dòng)物疾病模型廣泛應(yīng)用于疾病機(jī)制研究。

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    IgA腎病小鼠模型一、目的建立IgA腎病小鼠模型,并觀察模型的生化及病理指標(biāo)特點(diǎn)。二、試劑耗材1、酸化水:鹽酸調(diào)滅菌水;2、蓖麻油+CCl4:5:1配制;3、LPS:生理鹽水配制;4、血清白蛋白BSA:800mg/kg用量,滅菌水配制;三、方法:小鼠BSA+CCl4+脂多糖LPS誘導(dǎo)法1、20g小鼠牛血清白蛋白BSA(800mg/kg)隔天灌胃1次,配制160mg/ml,灌胃100ul/只,持續(xù)8周;2、同時(shí)皮下注射蓖麻油和CCl4(5:1),1次/周,持續(xù)8周;3、分別于第6、8周以()尾靜脈注射LPS,1次/周;4、每?jī)芍苋?4h尿液一次觀察尿蛋白及紅細(xì)胞;5、每日觀察精神、飲食、大小便,第9周處死,取血和腎、肝做相應(yīng)檢查;6、取尿液后2000r/min離心10min,取上清用全自動(dòng)生化儀檢測(cè)尿蛋白肌酐比值,鏡下觀察尿沉渣中有無(wú)紅細(xì)胞。小鼠疾病模型應(yīng)用于轉(zhuǎn)化醫(yī)學(xué)研究中的思路與策略該研究從臨床患者中篩選到潛在的致病基因。如何使用疾病動(dòng)物模型建模優(yōu)勢(shì)

能夠準(zhǔn)確模擬人相關(guān)特定功能與疾病特征。楊浦區(qū)品質(zhì)好的疾病動(dòng)物模型建模

    代謝組學(xué)的研究對(duì)象大都是相對(duì)分子量在1000以內(nèi)的小分子物質(zhì),因此常用的血液樣本在取樣后,應(yīng)小心操作,防止溶血,盡快分離出血清,分置于溫環(huán)境下保存。由于用于病理實(shí)驗(yàn)的動(dòng)物組織采集相對(duì)其他樣品的采集,操作更繁瑣,在處理過(guò)程中許多細(xì)節(jié)容易忽略,造成數(shù)據(jù)不完美(甚至不能用)。因此接下來(lái)將重點(diǎn)介紹組織樣品采集的注意事項(xiàng)及其固定。組織樣品采集注意事項(xiàng)組織應(yīng)新鮮,操作時(shí)間盡可能短,否則細(xì)胞發(fā)生死后變化、自融及現(xiàn)象。是動(dòng)物心臟還在跳動(dòng)時(shí)采集,樣本取出后在5分鐘以內(nèi)置于固定液內(nèi),避免長(zhǎng)時(shí)間暴露在空氣環(huán)境中。組織塊盡量小而薄。組織塊的厚度以不超過(guò)5mm為宜,較為理想的厚度為2mm左右,主要目的是使固定液迅速而均勻的滲入組織塊內(nèi)部。勿使組織塊受擠壓。在采集過(guò)程中,應(yīng)盡量選擇較為鋒利的手術(shù)器械,如手術(shù)刀片等,避免操作過(guò)程中擠壓挫傷標(biāo)本。擠壓過(guò)的組織均不可用。固定液的量一般以組織塊大小的20倍為宜,組織能夠在容器內(nèi)自由移動(dòng)。盡量保持組織的原有形態(tài)。新鮮組織經(jīng)固定后,或多或少產(chǎn)生收縮現(xiàn)象(如胃腸),為此可將組織展平,以盡可能維持原形。保持組織清潔。組織塊上如有血液、污物、粘液、食物、糞便等,可用生理鹽水沖洗。楊浦區(qū)品質(zhì)好的疾病動(dòng)物模型建模