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大/小鼠腎缺血再灌注損傷（RIRI）模型_艾菱菲生物
一、背景
腎缺血再灌注損傷（RIRI）是急性腎損傷（Acute Kidney Injury, AKI）的主要病理機制之一，常見于腎移植、休克、創(chuàng)傷或心臟手術等臨床場景。缺血期導致腎組織缺氧和能量代謝障礙，再灌注后活性氧（ROS）爆發(fā)、炎癥反應加劇及細胞凋亡***，進一步加重腎損傷。研究RIRI的分子機制及干預措施對改善臨床預后具有重要意義。
二、造模方法
- 實驗動物選擇品系：SD大鼠、Wistar大鼠或C57BL/6小鼠（品系差異可能影響損傷程度）。
- 性別與體重：通常選用雄性，大鼠體重200-250 g，小鼠20-25 g。
- 適應性飼養(yǎng)：標準SPF環(huán)境，自由飲食飲水，術前禁食12小時（不禁水）。
手術造模流程大鼠RIRI模型步驟：
- 保定麻醉開腹手術：腹中線切口暴露雙側腎蒂（血管、輸尿管及神經(jīng)束）。
- 缺血誘導：用無創(chuàng)動脈夾（如Bulldog夾）夾閉單側或雙側腎蒂。①單側夾閉：需對側腎切除（用于腎功能評價）。②雙側夾閉：直接模擬雙腎缺血（需嚴格控制缺血時間以防高死亡率）。
- 再灌注：移除動脈夾恢復血流，肉眼觀察腎臟顏色由暗紅轉為鮮紅。
- 縫合：逐層縫合肌肉層和皮膚，術后保溫并注射鎮(zhèn)痛藥物（如布托啡諾）。
關鍵參數(shù)：
- 缺血時間：30-45分鐘（依研究目的調(diào)整，時間過長易致不可逆損傷）。
- 再灌注時間：24-48小時為常見觀察窗口。
小鼠RIRI模型
- 麻醉與切口：麻醉，腹側切口約1 cm。
- 腎蒂暴露：用棉簽輕推腸管，暴露腎蒂后以微血管夾（如Fine Science Tools夾）夾閉。
- 缺血與再灌注：缺血時間通?？s短至20-30分鐘（因小鼠代謝快，耐受力低于大鼠）。
- 注意事項：術中維持體溫（37℃）以防低溫加重損傷。假手術組*開腹不夾閉腎蒂。
三、檢測與評價腎功能評估
血清生化指標：
血肌酐（Scr）和尿素氮（BUN）：通過尾靜脈或心臟**，酶法或比色法檢測，升高提示腎小球濾過功能受損。
尿液分析：尿蛋白（UPRO）和尿NAG酶（腎小管損傷標志物）。
（二）組織病理學分析
HE染色：觀察腎小管上皮細胞空泡化、刷狀緣脫落、管型形成及炎細胞浸潤。
損傷評分：根據(jù)腎小管壞死程度分為0-4級（0：無損傷；4：>50%壞死）。PAS染色：評估腎小球基底膜完整性。
（三）氧化應激與炎癥指標氧化損傷：
MDA（丙二醛）：脂質(zhì)過氧化產(chǎn)物，硫代巴比妥酸法檢測。
SOD（超氧化物歧化酶）和GSH（谷胱甘肽）：抗氧化能力指標。炎癥因子：ELISA檢測血清或腎組織TNF-α、IL-6、IL-1β水平。
（四）細胞凋亡檢測TUNEL染色：標記凋亡細胞核，計算凋亡率。Western blot：檢測凋亡相關蛋白（如Bax、Bcl-2、Caspase-3）。
（五）分子機制研究NF-κB、MAPK信號通路：蛋白表達與磷酸化水平分析。自噬相關蛋白（LC3-II/LC3-I、p62）：評估自噬在RIRI中的作用。
四、結論
RIRI大鼠和小鼠模型是研究急性腎損傷機制及干預策略的有效工具，結合多維度評價體系可***解析病理生理過程。未來需進一步開發(fā)無創(chuàng)監(jiān)測技術（如生物發(fā)光成像）并探索跨物種轉化研究。以上內(nèi)容可根據(jù)具體實驗需求調(diào)整參數(shù)和方法細節(jié)。
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