核細胞、關(guān)節(jié)軟骨細胞、間充質(zhì)干細胞（MSCs）：選擇兩種合成轉(zhuǎn)染試劑（陽離子脂質(zhì)商業(yè)試劑LipofectamineRNAiMAX和聚乙烯亞胺（PEI））以及兩種天然衍生轉(zhuǎn)染試劑（多糖殼聚糖（98%脫乙?；┖屯该髻|(zhì)酸（20%酰胺化）），用于將siRNA遞送到包括髓核細胞、關(guān)節(jié)軟骨細胞和間充質(zhì)干細胞在內(nèi)的原代間充質(zhì)細胞中。以甘油醛-3-磷酸脫氫酶（***DH）作為內(nèi)源性模型基因，在轉(zhuǎn)染后第3天和第6天評估由20nM或200nMsiRNA引起的沉默程度。除了沉默效率外，還評估了細胞毒性、DNA含量變化和細胞分化潛能等非特異性影響。在四種轉(zhuǎn)染試劑中，基于商業(yè)脂質(zhì)體的試劑在20nMsiRN...

RNA轉(zhuǎn)染試劑在不同細胞類型中的轉(zhuǎn)染機制存在多種差異。以下將詳細闡述不同RNA轉(zhuǎn)染試劑在不同細胞類型中轉(zhuǎn)染機制的差異表現(xiàn)。脂質(zhì)體轉(zhuǎn)染試劑：機制概述：脂質(zhì)體轉(zhuǎn)染試劑通常由陽離子脂質(zhì)和中性脂質(zhì)組成，其轉(zhuǎn)染機制主要是通過與帶負電的RNA分子結(jié)合，形成脂質(zhì)體-RNA復(fù)合物。這個復(fù)合物能夠與細胞膜相互作用，通過內(nèi)吞作用或膜融合等方式進入細胞。進入細胞后，脂質(zhì)體-RNA復(fù)合物逐漸釋放RNA分子，使其能夠在細胞內(nèi)發(fā)揮作用。在不同細胞類型中的表現(xiàn)：在腎*細胞系786-O和ACHN中，目前雖未明確提及脂質(zhì)體轉(zhuǎn)染試劑的作用，但可以推測其可能通過類似的機制進入細胞，影響細胞內(nèi)的基因表達和細胞生長。例如，微小RNA-...

RNA電穿孔高效轉(zhuǎn)染原代淋巴細胞：使用體外轉(zhuǎn)錄的mRNA通過電穿孔可以實現(xiàn)高基因轉(zhuǎn)染效率和低轉(zhuǎn)染相關(guān)毒性。例如，在用GFP或mCD62L轉(zhuǎn)染的受激原代人和鼠T淋巴細胞中觀察到90％以上的轉(zhuǎn)基因表達和80％以上的活細胞。GFPRNA對未刺激的人PBMC或鼠脾細胞進行電穿孔，分別產(chǎn)生95％和56％的GFP?細胞。此外，基因表達迅速且持久，對經(jīng)過RNA電穿孔的T淋巴細胞未觀察到不良影響7。五、優(yōu)化共轉(zhuǎn)染方法整合共轉(zhuǎn)染和平行共轉(zhuǎn)染：研究不同的共轉(zhuǎn)染和連續(xù)轉(zhuǎn)染方法，特別是體外轉(zhuǎn)錄信使RNA（IVTmRNA）。對于在納米載體形成之前預(yù)混合的IVTmRNAs（整合共轉(zhuǎn)染）和同時用單獨形成的納米載體轉(zhuǎn)染細胞（...

動物視網(wǎng)膜成像技術(shù)為基礎(chǔ)研究提供了有力工具。從小鼠視網(wǎng)膜多種成像方式探討眼科光學(xué)成像技術(shù)進展：張鵬飛、張廷瑋、宋維業(yè)闡述了近年來在小鼠和人眼視網(wǎng)膜高精度光學(xué)成像領(lǐng)域出現(xiàn)的技術(shù)突破6。幾種在人眼視網(wǎng)膜成像中廣泛應(yīng)用的光學(xué)成像技術(shù)在動物視網(wǎng)膜中得到了成功應(yīng)用，實現(xiàn)了對動物視網(wǎng)膜的高精度細胞級別成像，為科研工作者提供了有力工具。同時，動物視網(wǎng)膜的研究工作也開發(fā)了一些新型成像技術(shù)或增強了對人眼視網(wǎng)膜功能機理的理解。綜上所述，動物成像技術(shù)在磁共振成像、熱成像、X射線發(fā)光成像、近紅外高光譜成像、非人靈長類動物超高場磁共振腦成像、新型動物搖籃的小動物多重成像、紅外成像以及動物視網(wǎng)膜成像等方面都取得了***的...

三、脂質(zhì)體組成對轉(zhuǎn)染效率的影響不同脂質(zhì)組成的影響：研究發(fā)現(xiàn)脂質(zhì)體的組成對不同類型細胞的轉(zhuǎn)染效率有影響。例如，四種不同的DOTAP與DOPE重量比的脂質(zhì)體配方對不同細胞系的轉(zhuǎn)染效率不同。Huh7和AGS細胞的比較好脂質(zhì)體組成是T1P0和T3P1；COS7細胞是T3P1和T1P1；A549細胞是T1P1和T1P36。脂質(zhì)體結(jié)構(gòu)的影響：脂質(zhì)體復(fù)合物的形狀會隨著DOPE比例的增加從層狀結(jié)構(gòu)變?yōu)榈沽切谓Y(jié)構(gòu)，但在所有使用的細胞系中，特定結(jié)構(gòu)在轉(zhuǎn)染效率上沒有明確的優(yōu)勢6。四、其他因素的影響血清的影響：對于某些細胞，血清的存在會影響轉(zhuǎn)染效率。如Siha細胞在無血清培養(yǎng)基中培養(yǎng)時轉(zhuǎn)染效率更高，而在Caco-2...

靶向特定基因座提高穩(wěn)定轉(zhuǎn)染效率：在布魯氏錐蟲中，利用RNAi的構(gòu)建體和（GFP）標記的蛋白的表達，靶向（hyg）標記的核糖體RNA（RRNA）基因座，可以規(guī)避位置效應(yīng)并提高靶向效率。該系統(tǒng)還利用新的誘導(dǎo)型RRNA啟動子來驅(qū)動T7RNA聚合酶（T7RNAP）轉(zhuǎn)錄，然后從誘導(dǎo)型T7啟動子驅(qū)動表達，可減輕當前表達系統(tǒng)的一些問題9。綜上所述，提高RNA轉(zhuǎn)染效率的策略包括選擇合適的轉(zhuǎn)染試劑、利用魚精蛋白、優(yōu)化電轉(zhuǎn)方法、采用RNA電穿孔、優(yōu)化共轉(zhuǎn)染方法以及靶向特定基因座等。這些策略可以根據(jù)不同的實驗需求和細胞類型進行選擇和組合，以提高RNA轉(zhuǎn)染效率，為RNA研究和應(yīng)用提供有力支持。核酸與轉(zhuǎn)染試劑的比例對轉(zhuǎn)...

其他轉(zhuǎn)染試劑：機制概述：例如CALNPRNAi轉(zhuǎn)染試劑，其轉(zhuǎn)染機制可能與傳統(tǒng)轉(zhuǎn)染試劑不同。該試劑轉(zhuǎn)染效率***高于傳統(tǒng)轉(zhuǎn)染試劑，同時毒性比較低。其具體轉(zhuǎn)染機制可能涉及對RNA的攝取、細胞利用率及細胞毒性的綜合作用。在不同細胞類型中的表現(xiàn)：目前文獻中未明確提及CALNPRNAi轉(zhuǎn)染試劑在特定細胞類型中的具體表現(xiàn)，但研究表明該試劑為難轉(zhuǎn)染細胞的RNA干擾帶來了新的選擇7。綜上所述，不同RNA轉(zhuǎn)染試劑在不同細胞類型中的轉(zhuǎn)染機制存在差異，這些差異主要表現(xiàn)在與RNA的結(jié)合方式、進入細胞的途徑以及在細胞內(nèi)的釋放和作用方式等方面。了解這些差異對于選擇合適的轉(zhuǎn)染試劑進行特定細胞類型的RNA轉(zhuǎn)染實驗具有重要意義...

對細胞活力的影響：一些研究表明，在陽離子脂質(zhì)體LipofectamineTM2000介導(dǎo)下雞TRPV6基因RNA干擾（RNAi）質(zhì)粒轉(zhuǎn)染入成骨細胞的實驗中，當轉(zhuǎn)染前細胞融合達到90％以上，質(zhì)粒DNA與脂質(zhì)體比例為1:2.5時轉(zhuǎn)染效率比較高，并且在轉(zhuǎn)染后48h轉(zhuǎn)染效果比較好，對細胞的毒性作用較小3。在人肝瘤兩種細胞模型中，通過比較LipofectamineRnaimax和Genmute轉(zhuǎn)染劑發(fā)現(xiàn)，用基因***的細胞呈現(xiàn)熒光陰性對照siRNA的更高攝取，并且觀察到與基因轉(zhuǎn)染的細胞相對于脂質(zhì)積rnaimax的細胞具有較高的活力6。有研究使用兩種常見的RNA干擾（RNAi）轉(zhuǎn)染試劑DharmaFE...

RNA電穿孔高效轉(zhuǎn)染原代淋巴細胞：使用體外轉(zhuǎn)錄的mRNA通過電穿孔可以實現(xiàn)高基因轉(zhuǎn)染效率和低轉(zhuǎn)染相關(guān)毒性。例如，在用GFP或mCD62L轉(zhuǎn)染的受激原代人和鼠T淋巴細胞中觀察到90％以上的轉(zhuǎn)基因表達和80％以上的活細胞。GFPRNA對未刺激的人PBMC或鼠脾細胞進行電穿孔，分別產(chǎn)生95％和56％的GFP?細胞。此外，基因表達迅速且持久，對經(jīng)過RNA電穿孔的T淋巴細胞未觀察到不良影響7。五、優(yōu)化共轉(zhuǎn)染方法整合共轉(zhuǎn)染和平行共轉(zhuǎn)染：研究不同的共轉(zhuǎn)染和連續(xù)轉(zhuǎn)染方法，特別是體外轉(zhuǎn)錄信使RNA（IVTmRNA）。對于在納米載體形成之前預(yù)混合的IVTmRNAs（整合共轉(zhuǎn)染）和同時用單獨形成的納米載體轉(zhuǎn)染細胞（...

納米顆粒遞送藥物并發(fā)揮功能的能力在很大程度上取決于它們被細胞攝取的機制。以蒲公英湯劑體為例，研究發(fā)現(xiàn)親溶酶體物質(zhì)能***抑制蒲公英湯劑體進入細胞；巨胞飲抑制劑細胞松弛素D和阿米洛利能***降低蒲公英湯劑體的胞內(nèi)攝入，且呈現(xiàn)劑量依賴性，敲減Rac1和PAK1也有效地抑制其進入細胞。這些結(jié)果提示蒲公英湯劑體通過內(nèi)吞進入A549細胞且主要由巨胞飲介導(dǎo)26。同理，RNA轉(zhuǎn)染試劑在某些情況下也可能利用巨胞飲途徑進入細胞。電穿孔轉(zhuǎn)染中的內(nèi)吞途徑電穿孔轉(zhuǎn)染是一種用于基因遞送的技術(shù)，在研究其機制時發(fā)現(xiàn)，用冰冷介質(zhì)處理或在電穿孔轉(zhuǎn)染前使用內(nèi)吞抑制劑處理三種不同的人類細胞系（HEK293、HCT116和HT29）...

在人類多能干細胞衍生的心肌細胞（HPSC-CMs）中的應(yīng)用低轉(zhuǎn)染效率是實現(xiàn)HPSC-CMs在疾病建模和心臟修復(fù)研究中廣泛應(yīng)用的障礙。通過優(yōu)化四個基本參數(shù)，即血清補充劑、復(fù)制和轉(zhuǎn)染之間的時間、試劑與DNA比以及細胞密度，使用Promega的Viafect?轉(zhuǎn)染試劑能夠?qū)PSC-CMs轉(zhuǎn)染至約95%的效率28。盡管活力有所降低，但轉(zhuǎn)染后的HPSC-CMs仍保持了高純度和結(jié)構(gòu)完整性，確保了至少14天的轉(zhuǎn)染基因持續(xù)表達，為心臟相關(guān)疾病的研究開辟了新機遇。在C2C12細胞中的應(yīng)用C2C12細胞在肌肉領(lǐng)域***使用，但它們和原代成肌細胞一樣難以轉(zhuǎn)染，影響了下游實驗。雖然自2015年以來超過95%的使用C...

轉(zhuǎn)染時間：轉(zhuǎn)染時間的長短也會影響轉(zhuǎn)染效率。過長或過短的轉(zhuǎn)染時間都可能導(dǎo)致轉(zhuǎn)染效率降低。在陽離子脂質(zhì)體Lipofectamine2000對PC12細胞的轉(zhuǎn)染實驗中，轉(zhuǎn)染時間為6h時轉(zhuǎn)染效率較高3。在優(yōu)化宮頸*細胞系轉(zhuǎn)染效率的實驗中，Hela細胞系和Siha細胞系的比較好轉(zhuǎn)染時間為24小時1。細胞接種密度：細胞接種密度也會影響轉(zhuǎn)染效率。過高或過低的細胞接種密度都可能導(dǎo)致轉(zhuǎn)染效率降低。在脂質(zhì)體介導(dǎo)法轉(zhuǎn)染腫瘤細胞效率的優(yōu)化實驗中，2×105接種密度時轉(zhuǎn)染效率比較高9。在優(yōu)化宮頸*細胞系轉(zhuǎn)染效率的實驗中，Hela細胞系和Siha細胞系的比較好接種密度分別為1.5×104（每孔24孔板）1。血清的有無：血...

陽離子聚合物作為轉(zhuǎn)染試劑結(jié)合機制：以陽離子聚合物EZTransCellReagent為例，在優(yōu)化RNA干擾（RNAi）條件的研究中發(fā)現(xiàn)，陽離子聚合物通過與RNA分子結(jié)合來實現(xiàn)轉(zhuǎn)染14。例如，設(shè)計針對GFP的shRNA，使用EZ轉(zhuǎn)染試劑將其轉(zhuǎn)染到細胞中，shRNA***降低了GFP的表達。預(yù)稀釋的轉(zhuǎn)染試劑在室溫下以及小核酸的存在可增加轉(zhuǎn)染效率，且在24小時時達到峰值。與環(huán)狀核酸相比，線性核酸與陽離子聚合物結(jié)合時顯示出更高的轉(zhuǎn)染效率和更高的基因組整合率。作用特點：陽離子聚合物介導(dǎo)的RNAi條件優(yōu)化后，為未來的RNAi研究提供了有用的數(shù)據(jù)。影響物理轉(zhuǎn)染或機械轉(zhuǎn)染效率的因素在很大程度上取決于這些方法的...

在核酸遞送中的應(yīng)用核酸***可以通過基因增強、基因抑制和基因組編輯實現(xiàn)持久甚至***的效果。然而，裸核酸分子難以進入細胞，陽離子聚合物作為非病毒核酸遞送系統(tǒng)，其分子上帶有正電荷基團，可濃縮核酸分子形成納米顆粒，幫助核酸跨越屏障在細胞中表達蛋白質(zhì)或抑制目標基因表達。陽離子聚合物易于合成、修飾和結(jié)構(gòu)控制，是一類有前途的核酸遞送系統(tǒng)7。在顱內(nèi)遞送合成mRNA中的應(yīng)用在本研究中，使用常用的轉(zhuǎn)染試劑建立了顱內(nèi)遞送合成mRNA的小鼠模型。將合成的熒光素酶mRNAs用兩種不同的轉(zhuǎn)染試劑包裹后定點微注射到大腦中，通過小動物成像系統(tǒng)監(jiān)測遞送的mRNA的表達狀態(tài)，并通過行為和血液生化測量評估可能的試劑誘導(dǎo)的生物毒...

原代細胞和干細胞的轉(zhuǎn)染效率通常較低。原代細胞剛剛從組織中分離出來，還保留著體內(nèi)復(fù)雜的生理特性，其細胞膜上的受體和內(nèi)吞機制等可能不適應(yīng)脂質(zhì)體轉(zhuǎn)染。例如，原代間充質(zhì)干細胞的轉(zhuǎn)染效率可能低于10%。干細胞由于其特殊的自我更新和分化潛能，其細胞內(nèi)部的信號通路和膜運輸機制對脂質(zhì)體轉(zhuǎn)染比較敏感，轉(zhuǎn)染效率也不高。而且在轉(zhuǎn)染過程中，還需要考慮不影響干細胞的干性，這也增加了轉(zhuǎn)染的難度。 原代細胞和干細胞對脂質(zhì)體的毒性反應(yīng)比較敏感。脂質(zhì)體可能會干擾它們的正常生理功能，如影響干細胞的自我更新和分化能力。對于原代細胞，可能會改變其原有的表型或者***細胞的應(yīng)激反應(yīng)，導(dǎo)致細胞提前衰老或者死亡。 基因注射包括通...

對于容易轉(zhuǎn)染的貼壁細胞如人胚腎細胞（HEK293）和人宮頸*細胞（HeLa），脂質(zhì)體轉(zhuǎn)染效率相對較高。這些細胞具有較強的內(nèi)吞能力，能夠有效地攝取脂質(zhì)體-核酸復(fù)合物。例如，在標準的轉(zhuǎn)染條件下，HEK293細胞的轉(zhuǎn)染效率可以達到50%-70%。而對于一些難轉(zhuǎn)染的貼壁細胞，如原代肝細胞和某些神經(jīng)細胞，其轉(zhuǎn)染效率較低。這是因為它們的細胞膜結(jié)構(gòu)比較復(fù)雜，可能存在較厚的糖萼或者緊密的細胞間連接，阻礙了脂質(zhì)體-核酸復(fù)合物的進入。例如，原代肝細胞的轉(zhuǎn)染效率可能只有10%-20%。 一般來說，貼壁細胞對脂質(zhì)體的耐受性相對較好。但是，在高濃度脂質(zhì)體轉(zhuǎn)染的情況下，即使是耐受性好的細胞也會受到影響。例如，H...

其他轉(zhuǎn)染試劑：機制概述：例如CALNPRNAi轉(zhuǎn)染試劑，其轉(zhuǎn)染機制可能與傳統(tǒng)轉(zhuǎn)染試劑不同。該試劑轉(zhuǎn)染效率***高于傳統(tǒng)轉(zhuǎn)染試劑，同時毒性比較低。其具體轉(zhuǎn)染機制可能涉及對RNA的攝取、細胞利用率及細胞毒性的綜合作用。在不同細胞類型中的表現(xiàn)：目前文獻中未明確提及CALNPRNAi轉(zhuǎn)染試劑在特定細胞類型中的具體表現(xiàn)，但研究表明該試劑為難轉(zhuǎn)染細胞的RNA干擾帶來了新的選擇7。綜上所述，不同RNA轉(zhuǎn)染試劑在不同細胞類型中的轉(zhuǎn)染機制存在差異，這些差異主要表現(xiàn)在與RNA的結(jié)合方式、進入細胞的途徑以及在細胞內(nèi)的釋放和作用方式等方面。了解這些差異對于選擇合適的轉(zhuǎn)染試劑進行特定細胞類型的RNA轉(zhuǎn)染實驗具有重要意義...

轉(zhuǎn)染時間對奶牛子宮內(nèi)膜原代上皮細胞轉(zhuǎn)染的影響：在奶牛子宮內(nèi)膜原代上皮細胞中，應(yīng)用帶有FAM標記的miRNA-185mimics為報告基因，檢測兩種不同轉(zhuǎn)染試劑（LipofectamineRNAiMAX與Lipofectamine2000）在細胞接種不同時間后的轉(zhuǎn)染效率33。結(jié)果顯示，無論使用哪種轉(zhuǎn)染試劑，12h的轉(zhuǎn)染效率均極***高于18、24h，LipofectamineRNAiMAX各時間點的轉(zhuǎn)染效率均極***高于Lipofectamine2000。并且，使用LipofectamineRNAiMAX作為轉(zhuǎn)染試劑時，12h的熒光強度也比較高。這說明在奶牛子宮內(nèi)膜原代上皮細胞中，選擇合適的轉(zhuǎn)染...

對細胞周期的影響：在微小RNA-1180轉(zhuǎn)染腎*細胞的實驗中，F(xiàn)CM結(jié)果顯示，轉(zhuǎn)染miR-1180后，位于G0/G1期的細胞比例明顯增大，而位于S期和G2/M期的細胞比例明顯下降，表明細胞周期被阻滯在G0/G1期1。對轉(zhuǎn)染效率的影響：在脂質(zhì)體介導(dǎo)RNA干擾質(zhì)粒轉(zhuǎn)染雞成骨細胞條件的優(yōu)化實驗中，對轉(zhuǎn)染前細胞融合度、質(zhì)粒質(zhì)量與脂質(zhì)體體積比及轉(zhuǎn)染時間進行優(yōu)化，在熒光倒置顯微鏡下觀察并計算轉(zhuǎn)染效率。結(jié)果表明，在轉(zhuǎn)染前細胞融合達到90％以上，質(zhì)粒DNA與脂質(zhì)體比例為1:2.5時轉(zhuǎn)染效率比較高，并且在轉(zhuǎn)染后48h轉(zhuǎn)染效果比較好3。在篩選更優(yōu)的脂質(zhì)體轉(zhuǎn)染試劑的實驗中，分別用RNAiMax及MessageM...

三、脂質(zhì)體組成對轉(zhuǎn)染效率的影響不同脂質(zhì)組成的影響：研究發(fā)現(xiàn)脂質(zhì)體的組成對不同類型細胞的轉(zhuǎn)染效率有影響。例如，四種不同的DOTAP與DOPE重量比的脂質(zhì)體配方對不同細胞系的轉(zhuǎn)染效率不同。Huh7和AGS細胞的比較好脂質(zhì)體組成是T1P0和T3P1；COS7細胞是T3P1和T1P1；A549細胞是T1P1和T1P36。脂質(zhì)體結(jié)構(gòu)的影響：脂質(zhì)體復(fù)合物的形狀會隨著DOPE比例的增加從層狀結(jié)構(gòu)變?yōu)榈沽切谓Y(jié)構(gòu)，但在所有使用的細胞系中，特定結(jié)構(gòu)在轉(zhuǎn)染效率上沒有明確的優(yōu)勢6。四、其他因素的影響血清的影響：對于某些細胞，血清的存在會影響轉(zhuǎn)染效率。如Siha細胞在無血清培養(yǎng)基中培養(yǎng)時轉(zhuǎn)染效率更高，而在Caco-2...

三、脂質(zhì)體組成對轉(zhuǎn)染效率的影響不同脂質(zhì)組成的影響：研究發(fā)現(xiàn)脂質(zhì)體的組成對不同類型細胞的轉(zhuǎn)染效率有影響。例如，四種不同的DOTAP與DOPE重量比的脂質(zhì)體配方對不同細胞系的轉(zhuǎn)染效率不同。Huh7和AGS細胞的比較好脂質(zhì)體組成是T1P0和T3P1；COS7細胞是T3P1和T1P1；A549細胞是T1P1和T1P36。脂質(zhì)體結(jié)構(gòu)的影響：脂質(zhì)體復(fù)合物的形狀會隨著DOPE比例的增加從層狀結(jié)構(gòu)變?yōu)榈沽切谓Y(jié)構(gòu)，但在所有使用的細胞系中，特定結(jié)構(gòu)在轉(zhuǎn)染效率上沒有明確的優(yōu)勢6。四、其他因素的影響血清的影響：對于某些細胞，血清的存在會影響轉(zhuǎn)染效率。如Siha細胞在無血清培養(yǎng)基中培養(yǎng)時轉(zhuǎn)染效率更高，而在Caco-2...

對于容易轉(zhuǎn)染的貼壁細胞如人胚腎細胞（HEK293）和人宮頸*細胞（HeLa），脂質(zhì)體轉(zhuǎn)染效率相對較高。這些細胞具有較強的內(nèi)吞能力，能夠有效地攝取脂質(zhì)體-核酸復(fù)合物。例如，在標準的轉(zhuǎn)染條件下，HEK293細胞的轉(zhuǎn)染效率可以達到50%-70%。而對于一些難轉(zhuǎn)染的貼壁細胞，如原代肝細胞和某些神經(jīng)細胞，其轉(zhuǎn)染效率較低。這是因為它們的細胞膜結(jié)構(gòu)比較復(fù)雜，可能存在較厚的糖萼或者緊密的細胞間連接，阻礙了脂質(zhì)體-核酸復(fù)合物的進入。例如，原代肝細胞的轉(zhuǎn)染效率可能只有10%-20%。 一般來說，貼壁細胞對脂質(zhì)體的耐受性相對較好。但是，在高濃度脂質(zhì)體轉(zhuǎn)染的情況下，即使是耐受性好的細胞也會受到影響。例如，H...

RNA電穿孔高效轉(zhuǎn)染原代淋巴細胞：使用體外轉(zhuǎn)錄的mRNA通過電穿孔可以實現(xiàn)高基因轉(zhuǎn)染效率和低轉(zhuǎn)染相關(guān)毒性。例如，在用GFP或mCD62L轉(zhuǎn)染的受激原代人和鼠T淋巴細胞中觀察到90％以上的轉(zhuǎn)基因表達和80％以上的活細胞。GFPRNA對未刺激的人PBMC或鼠脾細胞進行電穿孔，分別產(chǎn)生95％和56％的GFP?細胞。此外，基因表達迅速且持久，對經(jīng)過RNA電穿孔的T淋巴細胞未觀察到不良影響7。五、優(yōu)化共轉(zhuǎn)染方法整合共轉(zhuǎn)染和平行共轉(zhuǎn)染：研究不同的共轉(zhuǎn)染和連續(xù)轉(zhuǎn)染方法，特別是體外轉(zhuǎn)錄信使RNA（IVTmRNA）。對于在納米載體形成之前預(yù)混合的IVTmRNAs（整合共轉(zhuǎn)染）和同時用單獨形成的納米載體轉(zhuǎn)染細胞（...

選擇合適的轉(zhuǎn)染試劑GenMute試劑在人肝*細胞模型中的應(yīng)用：在人肝*細胞HepG2和Huh7.5中，研究對比了脂質(zhì)體類的Lipofectamine?RNAiMAX和HepG2特異性的聚合物類GenMute?兩種轉(zhuǎn)染試劑30。通過細胞成像分析發(fā)現(xiàn)，GenMute處理的細胞對熒光標記的陰性對照siRNA的攝取高于LipofectamineRNAiMAX轉(zhuǎn)染的細胞。并且，MTT實驗表明，GenMute轉(zhuǎn)染的細胞比LipofectamineRNAiMAX處理的細胞具有更高的存活率。這提示在人肝*細胞模型中，GenMute試劑可能是更適合的轉(zhuǎn)染試劑，在提高轉(zhuǎn)染效率的同時降低了細胞死亡。siRNA共軛殼...

磁共振成像（MRI）技術(shù)磁共振成像技術(shù)是目前較為先進的醫(yī)學(xué)影像技術(shù)之一，在動物成像中也得到了廣泛應(yīng)用。優(yōu)化實驗動物眼部磁共振成像技術(shù)：王戰(zhàn)京、雷建鋒、焦昆的研究通過改進實驗動物眼部的磁共振成像技術(shù)，提高了眼科疾病研究的準確性，并促進了新治療方法的研發(fā)1。他們選用了健康的SD大鼠，利用Bruker7.0TMRI掃描儀進行檢測，通過精確的定位和細致的掃描參數(shù)調(diào)整，對比了T2WI與FLASH兩種成像技術(shù)。研究結(jié)果顯示，F(xiàn)LASH序列在眼部結(jié)構(gòu)成像中展現(xiàn)出更高的信噪比，從而提供了更為清晰的圖像和更豐富的組織細節(jié)。3T動物磁共振成像傳導(dǎo)冷卻超導(dǎo)磁體研究：陳順中、王秋良、孫萬碩采用傳導(dǎo)冷卻技術(shù)研制了一臺3...

其他轉(zhuǎn)染試劑：機制概述：例如CALNPRNAi轉(zhuǎn)染試劑，其轉(zhuǎn)染機制可能與傳統(tǒng)轉(zhuǎn)染試劑不同。該試劑轉(zhuǎn)染效率***高于傳統(tǒng)轉(zhuǎn)染試劑，同時毒性比較低。其具體轉(zhuǎn)染機制可能涉及對RNA的攝取、細胞利用率及細胞毒性的綜合作用。在不同細胞類型中的表現(xiàn)：目前文獻中未明確提及CALNPRNAi轉(zhuǎn)染試劑在特定細胞類型中的具體表現(xiàn)，但研究表明該試劑為難轉(zhuǎn)染細胞的RNA干擾帶來了新的選擇7。綜上所述，不同RNA轉(zhuǎn)染試劑在不同細胞類型中的轉(zhuǎn)染機制存在差異，這些差異主要表現(xiàn)在與RNA的結(jié)合方式、進入細胞的途徑以及在細胞內(nèi)的釋放和作用方式等方面。了解這些差異對于選擇合適的轉(zhuǎn)染試劑進行特定細胞類型的RNA轉(zhuǎn)染實驗具有重要意義...

納米顆粒遞送藥物并發(fā)揮功能的能力在很大程度上取決于它們被細胞攝取的機制。以蒲公英湯劑體為例，研究發(fā)現(xiàn)親溶酶體物質(zhì)能***抑制蒲公英湯劑體進入細胞；巨胞飲抑制劑細胞松弛素D和阿米洛利能***降低蒲公英湯劑體的胞內(nèi)攝入，且呈現(xiàn)劑量依賴性，敲減Rac1和PAK1也有效地抑制其進入細胞。這些結(jié)果提示蒲公英湯劑體通過內(nèi)吞進入A549細胞且主要由巨胞飲介導(dǎo)26。同理，RNA轉(zhuǎn)染試劑在某些情況下也可能利用巨胞飲途徑進入細胞。電穿孔轉(zhuǎn)染中的內(nèi)吞途徑電穿孔轉(zhuǎn)染是一種用于基因遞送的技術(shù)，在研究其機制時發(fā)現(xiàn)，用冰冷介質(zhì)處理或在電穿孔轉(zhuǎn)染前使用內(nèi)吞抑制劑處理三種不同的人類細胞系（HEK293、HCT116和HT29）...

魚精蛋白作為RNA遞送穩(wěn)定劑具有重要作用，其具體作用機制主要包括以下幾個方面：一、保護RNA免受降解魚精蛋白是一種天然陽離子肽混合物，由于其帶正電荷的特性，可以與帶負電荷的RNA通過相反電荷驅(qū)動耦合23。在生物系統(tǒng)中，RNA很容易被RNase降解，而魚精蛋白可以與RNA復(fù)合，形成穩(wěn)定的復(fù)合物，從而保護RNA免受降解1213。例如，通過將單鏈RNA（ssRNA）與帶正電荷的蛋白魚精蛋白復(fù)合，可以穩(wěn)定陰離子RNA1213。二、增強細胞穿透性魚精蛋白不僅可以保護RNA，還能增強RNA的穿透細胞的能力。魚精蛋白-RNA復(fù)合物的形成具有雙重功能，一方面保護RNA不被降解，另一方面增強其穿透進入細胞的能力...

動物視網(wǎng)膜成像技術(shù)為基礎(chǔ)研究提供了有力工具。從小鼠視網(wǎng)膜多種成像方式探討眼科光學(xué)成像技術(shù)進展：張鵬飛、張廷瑋、宋維業(yè)闡述了近年來在小鼠和人眼視網(wǎng)膜高精度光學(xué)成像領(lǐng)域出現(xiàn)的技術(shù)突破6。幾種在人眼視網(wǎng)膜成像中廣泛應(yīng)用的光學(xué)成像技術(shù)在動物視網(wǎng)膜中得到了成功應(yīng)用，實現(xiàn)了對動物視網(wǎng)膜的高精度細胞級別成像，為科研工作者提供了有力工具。同時，動物視網(wǎng)膜的研究工作也開發(fā)了一些新型成像技術(shù)或增強了對人眼視網(wǎng)膜功能機理的理解。綜上所述，動物成像技術(shù)在磁共振成像、熱成像、X射線發(fā)光成像、近紅外高光譜成像、非人靈長類動物超高場磁共振腦成像、新型動物搖籃的小動物多重成像、紅外成像以及動物視網(wǎng)膜成像等方面都取得了***的...

選擇合適的轉(zhuǎn)染試劑陽離子脂質(zhì)體：如LipofectamineTM2000等陽離子脂質(zhì)體是常用的轉(zhuǎn)染試劑。通過優(yōu)化轉(zhuǎn)染條件，如轉(zhuǎn)染前細胞融合度、質(zhì)粒質(zhì)量與脂質(zhì)體體積比及轉(zhuǎn)染時間等，可以提高轉(zhuǎn)染效率。例如，在脂質(zhì)體介導(dǎo)RNA干擾質(zhì)粒轉(zhuǎn)染雞成骨細胞的試驗中，當轉(zhuǎn)染前細胞融合達到90％以上，質(zhì)粒DNA與脂質(zhì)體比例為1:2.5時轉(zhuǎn)染效率比較高，并且在轉(zhuǎn)染后48h轉(zhuǎn)染效果比較好，對細胞的毒性作用較小4。二、利用天然陽離子肽混合物——魚精蛋白作為穩(wěn)定劑和增強劑：魚精蛋白不僅可以作為肝素的中和藥物和緩釋胰島素配方中的化合物，還可以用于核酸的細胞遞送。自***作為轉(zhuǎn)染增強劑使用以來，魚精蛋白已被***用作RNA...